本试剂盒的使用原理

检测范围： 96T7pg/ml-260pg/ml

使用目的：

本试剂盒用于测定人血清样本中白喉（Diphtherie）含量。

实验原理

本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人白喉（Diphtherie）水平。用纯化的人白喉（Diphtherie）抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入白喉（Diphtherie），再与HRP标记的白喉（Diphtherie）抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过*洗涤后加底物TMB 显色。TMB 在HRP 酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成zui终的黄色。色的深浅和样品中的白喉（Diphtherie）呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD 值），通过标准曲线计算样品中人白喉（Diphtherie）浓度。

试剂盒组成

1 30 倍浓缩洗涤液 20ml×1 瓶 7 终止液 6ml×1 瓶

2 酶标试剂 6ml×1 瓶 8 标准品（500pg/ml） 0.5ml×1 瓶

3 酶标包被板 12 孔×8 条 9 标准品稀释液 1.5ml×1 瓶

4 样品稀释液 6ml×1 瓶 10 说明书 1 份

5 显色剂A 液 6ml×1 瓶 11 封板膜 2 张

6 显色剂B 液 6ml×1/瓶 12 密封袋 1 个

标本要求

1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融

2．不能检测含NaN3 的样品，因NaN3 抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。

操作步骤

1. 标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。

250pg/ml 5 号标准品 150μl 的原倍标准品加入150μl 标准品稀释液

125pg/ml 4 号标准品 150μl 的5 号标准品加入150μl 标准品稀释液

62.5pg/ml 3 号标准品 150μl 的4 号标准品加入150μl 标准品稀释液

31.25pg/ml 2 号标准品 150μl 的3 号标准品加入150μl 标准品稀释液

15.625pg/ml 1 号标准品 150μl 的2 号标准品加入150μl 标准品稀释液

2. 加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl，待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品zui终稀释度为5 倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。

3. 温育：用封板膜封板后置37℃温育30 分钟。

4. 配液：将30 倍浓缩洗涤液用蒸馏水30 倍稀释后备用

5. 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30 秒后弃去，如此重复5 次，拍干。

6. 加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。

7. 温育：操作同3。

8. 洗涤：操作同5。

9. 显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色10 分钟.

10. 终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。

11. 测定：以空白空调零，450nm 波长依序测量各孔的吸光度（OD 值）。 测定应在加终止液后15 分钟以内进行。