人ELISA试剂盒操作步骤：

使用前，将所有试剂充分混匀。不要使液体产生大量的泡沫，以免加样时加入大量的气泡，产生加样上的误差。

根据待测样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数。每个标准品和空白孔建议做复孔。每个样品根据自己的数量来定，能使用复孔的尽量做复孔。标本用标本稀释液1:1稀释后加入50ul于反应孔内。

加入稀释好后的标准品50ul于反应孔、加入待测样品50ul于反应孔内。立即加入50ul的生物素标记的抗体。盖上膜板，轻轻振荡混匀，37℃温育1小时。

甩去孔内液体，每孔加满洗涤液，振荡30秒，甩去洗涤液，用吸水纸拍干。重复此操作3次。如果用洗板机洗涤，洗涤次数增加一次。

每孔加入80ul的亲和链酶素-HRP，轻轻振荡混匀，37℃温育30分钟。

甩去孔内液体，每孔加满洗涤液，振荡30秒，甩去洗涤液，用吸水纸拍干。重复此操作3次。如果用洗板机洗涤，洗涤次数增加一次。

每孔加入底物A、B各50ul，轻轻振荡混匀，37℃温育10分钟。避免光照。

取出酶标板，迅速加入50ul终止液，加入终止液后应立即测定结果。

在450nm波长处测定各孔的OD值。

6号标准品以上的结果为非线性的，根据此标准曲线无法得到jing确的结果。

 试剂盒性能

1. 灵敏度:小的检测浓度小于1号标准品。稀释度的线性。样品线性回归与预期浓度相关系数R值为0.990。

2. 特异性:不与其它细胞因子反应。

3. 重复性:板内、板间变异系数均小于10%。