进口Elisa试剂盒原理与特点
时间:2020-11-04 阅读:346
进口Elisa试剂盒原理:
采用竞争法测定金黄地鼠氧化低密度脂蛋白OXLDL水平。用金黄地鼠氧化低密度脂蛋白OXLDL抗原包被微孔板,制成固相载体,实验时依次在微孔板中加入标本及标准品,并加入HRP标记的OXLDL抗体,标本及标准品中的抗体和一定量的酶标抗体竞争与固相抗原结合。反复洗涤后加底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化为蓝色,再用硫酸终止反应,转变成黄色。标本中抗体量越多,结合在固相上的酶标抗体愈少,颜色越浅。颜色的深浅和样品中的OXLDL含量呈负相关。采用酶标仪在450nm波长测定吸光度(OD值),根据标准曲线,计算测试样品中OXLDL浓度。
进口Elisa试剂盒操作步骤:
1.使用前将试剂盒置室温30分钟,恢复至室温。
2.取所需用量酶标板条,设空白对照1孔、阴性/阳性对照各2孔,未用的板条尽快密封,2~8℃保存。
3.空白对照孔加样品稀释液100μl;阴、阳性对照孔分别加入阴、阳性对照100μl;样品孔每孔加入稀释后的样品100μl。
4.混匀,置37℃反应30分钟。
5.扣去孔内液体,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,重复洗涤5次,拍干。
6.每孔加酶标记物100μl(空白孔除外)。置37℃反应30分钟。
7.洗涤,同步骤5。
8.每孔依次加底物液A、底物液B各50μl,混匀,37℃避光反应10分钟。
9.每孔加终止液50μl,混匀,用空白孔调零,于450nm(可用630nm作参比波长)测定各孔吸光值(A值)。
进口Elisa试剂盒注意事项:
1.实验操作时需戴手套、穿工作衣,严格健全和执行消毒隔离制度,各种实验废弃物都应按传染物处理。
2.终止液具有腐蚀性,应避免接触皮肤和衣物,如不慎接触请立即用大量自来水冲洗。
3.酶标板从冷藏环境中取出时应恢复至室温方可开袋,未用完的酶标板需放入有干燥剂的密封袋中保存。
4.浓缩洗涤液在低温时容易结晶,使用时需恢复至室温以*溶解。
5.洗涤时各孔均需加满液体,防止孔口有游离酶不能洗净。
6.用于检测的样品应保持新鲜。
7.试验结果的判定必须以酶标仪读数为准。
8.不同批号试剂组分不得混用。
进口Elisa试剂盒特点:
一、高效、灵敏、特异的抗体。
二、稳定的重复性和可靠性。
三、吸附性能好,空白值低,孔底透明度高的固相载体。
四、适用血清、血浆、组织匀浆液、细胞培养上清液、尿液等等多种标本类型。
五、节省实验经费。