PCR检测试剂盒原理与注意事项
时间:2020-12-16 阅读:934
PCR检测试剂盒原理:
本试剂盒系由预包被PCR检测试剂盒的酶标板、酶标记物及其他配套试剂组成,应用酶联免疫法(ELISA)原理检测猪血清、血浆样本中猪瘟病毒抗体。实验时在酶标板中加入对照血清和待检样本,经温育后若样品中含有猪瘟病毒抗体,则将与酶标板上抗原结合,经洗涤除去未结合的其他成分后;再加入酶标记物,与酶标板上抗原抗体复合物发生特异性结合;再经洗涤除去未结合的酶标记物,在孔中加TMB底物液,与酶反应形成蓝色产物,显色深浅与样品中的特异性抗体含量成正相关;加入终止液终止反应后,产物变为黄色;用酶标仪在450nm波长测定各反应孔中的吸光值,即可知样品是否含有猪瘟病毒抗体。
PCR检测试剂盒注意事项:
1、样品的浓度等指标是根据标准曲线计算出来的,所以首先要把做标准曲线看作是比做正式实验还要重要的一件事,否则后面的实验结果无从谈起。
2、设置标准曲线样品的标准浓度范围要有一个比较大的跨度,并且要能涵盖你所要检测实验样品的浓度,即样品的浓度要在标准曲线浓度范围之内,包括上限和下限。而对于呈S型的标准曲线,尽量要使实验样品的浓度在中间坡度陡段,即曲线几乎成直线的范围内。
3、采用倍比稀释法配制标准曲线中的标准样品浓度,这样就能够保证标准样品的浓度不会出现较大的偏离。
4、检测标准样品时,应按浓度递增顺序进行,以减少高浓度对低浓度的影响,提高准确性。
5、标准曲线的样品数一般为7个点,但至少要保证有5个点。
6、做出的PCR检测试剂盒标准曲线相关系数因实验要求不同而有所变动,但一般来说,相关系数R至少要大于0.98,对于有些实验,至少要0.99甚至是0.999.
PCR检测试剂盒性能:
1. 准确性:标准品线性回归与预期浓度相关系数R值,大于等于0.9900。
2. 灵敏度:检测浓度小于0.1 U/mL。
3. 特异性:不与其它可溶性结构类似物交叉反应。
4. 重复性:板内、板间变异系数均小于15%。
5. 贮藏:2-8℃,避光防潮保存。
6. 有效期:6个月