ELISA试验阴性与阳性对照平均值计算与判断
时间:2023-11-20 阅读:978
阴性与阳性对照平均值计算与判断:
1.阴性对照平均值NCx有效性计算判断举例:
(1)第一类NCx计算与评价:以HBsAg为例
Ⅰ. 设置3孔的NCx计算:NCx=(0.011+0.010+0.090)/3=0.010
Ⅱ. 任一个NC值应≤0.100至≥-0.010;
Ⅲ. 各NC值也应介于≥0.5×NCx至≤1.5×NCx之间。此时各孔的NC值均处于NCx±0.006范围内,其中遇有一孔NC值偏离该范围时,则弃去该NC值,再计算NCx。如有2孔NC值超出该范围时,本次试验(无效)应予复试。
Ⅳ. 不同厂牌对NCx的具体要求略有不同,但总的原则几为一致,如<法>巴斯德HBsAg EIA Kit。
(2)第二类NCx计算与评价:可包括抗—HBc、抗—HBe。以抗—HBc、抗—HBe为例:
Ⅰ. 取3孔阴性对照A值的平均值:
抗—HBc NCx=(1.027+0.989+1.278)/3=1.065
抗—HBe NCx=(1.169+1.088+0.993)/3=1.083;
请各位注意:这2个NCx是不是很接近1.00呀?也就是说,十分接近C.O.I.(C.O./S,或C.O./A)=1.00!这不是一种偶然,而是国际试剂(如雅培)的“质量”标志。如果偏大,例如1.50以上,或者偏小,0.50以下,待检样本中会导致出现什么现象呢?请读者自己思考吧。
Ⅱ. 各孔NC值均应<2.000,并处于≥0.5×NCx至≤1.5×NCx之间。若其中1孔NC值偏离该范围时,弃去,再计算2孔的NC值的NCx。如有2孔NC值偏离该范围时,应重新试验。2.阳性对照平均值PCx有效性计算与评价也分为两类:
(1)第一类 PCx计算与评价:以HBsAg为例 DauI*sZmR
Ⅰ. 第一类PCx的计算不列入Cut off计算,可取(设)2—3孔阳性对照的平均值PCx(Abbott): PCx=(1.024+1.030)/2=1.027。注意:本例雅培试剂HBsAg的Cutoff值=NCx+0.05=0.06,PCx 的S/C.O.=1.027/0.06=17.12。如果S/C.O.超过20.00以上,提示HBsAg阳性对照含量太高!
Ⅱ. 参照方法学的要求,也可规定PCx应≥1.000(指A值),而且各孔PC值要求≥0.5×PCx 至≤1.5×PCx
Ⅲ. PC的设置及PCx的计算,主要用于评价本次试验结果是否有效和各批/次试验结果的稳定性和可比性,并不参与Cut off值的计算。同一个批号试剂及其阳性对照品在规定保存条件和有效期内,各次试验时PCx值也应保持相对稳定水平。换句话说,实验结果有效性评价时,也应观测阳性对照的“统计过程控制”(SPC)处于稳定状态—输出“控制图”。
(2)第二类PCx的计算与评价:也以抗—HBc为例
Ⅰ. 可取(设)2—3孔PC 的A值得平均值PCx: PCx=(0.051+0.038)/2=0.045
Ⅱ. 参照方法学要求,也可规定各孔PC值应处于≥0.5×PCx 至≤1.5×PCx范围内。
Ⅲ. PCx值参与Cut off值的计算,例如抗—HBc的Cut off(Abbott):
Cut off=0.4(NCx)+0.6(PCx)。
该值(Cut off)可以理解为:指示性定量HBcAg反应值的40%加定量抗—HBc反应值的60%之和,恰为健康人群血中抗—HBc正常值范围的界限。任一待检样本的检出值低于该Cut off值时则判为抗—HBc阳性,大于该Cut off值时则判为抗—HBc阴性。