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公司产品仅用于科研具有质量可靠、效果稳定、灵敏度高、操作简单、易保存等特点,咨询并订购!
产品名称 | 规格 | 货号 |
Laemmli加样缓冲液 | 5ml | FS-R7466 |
产品分类:蛋白电泳
储存条件:4℃,12个月
用途:变性不连续PAGE,蛋白加样缓冲液
注意事项:主要SDS、氧化剂、溴酚蓝等组成。
配制与标定的实验原理:
1、用EDTA二钠盐配制EDTA标准溶液的原因;
EDTA是四元酸,是一种白色晶体粉末,常用H4Y表示,溶解度很小,室温溶解度为0.02g/100g H2O。
2、标定EDTA标准溶液的工作基准试剂,基准试剂的预处理:称量前一般应先用稀盐酸洗去氧化层,然后用水洗净,烘干。
配制步骤:
1、取适量锌片放在100mL烧杯中,用0.1mol·L-1 HCl溶液(自配)清洗1min,再用自来水、纯水洗净,烘干、冷却。
2、用直接称量法在干燥小烧杯中准确称取0.15~0.2g Zn,盖好小表面皿。
3、用滴管从烧杯口加入5mL 1:1 盐酸,待Zn溶解后吹洗表面皿、杯壁,小心地将溶液转移至250mL容量瓶中,用纯水稀释至标线,摇匀。
实验方法与判定:
1.对照品溶液的稳定性
2.对照品溶液的配制:精密量取脑对照品适量,加无水乙醇制成每1ml含脑1mg的溶液,作为对照品溶液。
3.色谱条件:以交联键合聚乙二醇为固定相的毛细管柱;柱温120℃;进样口温度250℃;检测器温度250℃;分流进样,分流比10:1。理论塔板数按脑计算应不低于10000。
4.实验方法:配制的对照品溶液,一份置冷处保存,一份置室温中保存,在第1、3、7、10、15天重新配制一份对照品溶液,三种储备液同时稀释制成每1ml中约含50ug的溶液。照气相色谱法,并依据新对照品的峰面积计算原对照品溶液的含量。记录下来,保证原对照品溶液含量在考察期相对平均偏差不超过2.0%,验证对照品溶液在使用期内稳定可靠。
金乳牛肝菌猪繁殖与呼吸综合征/猪蓝耳病病抗体Anti-BAG3 Antibodyγ肽(Pγ)
澳型核果褐腐病菌凋亡相关蛋白10抗体Anti-BAG1 Antibodyγ谷酰转移(GGT)
澳型核果褐腐病菌钙调蛋白依赖性蛋白激磷抗体Anti-BAG1 Antibodyγ-谷酰环化转移(GGCT)
门多萨假单胞菌丝/苏蛋白激PIM3抗体Anti-BAG5 Antibodyγ谷酰半胱合成(γ-ECS)
蜡样芽孢杆菌组蛋白精甲基转移5抗体Anti-BAG5 Antibodyγ谷-半胱合成(γ-GCS)
热带假丝酵母原钙粘附蛋白11X抗体Anti-BAG3 Antibodyγ干扰诱导蛋白16/p16(IFI16/p16)
粉红聚端孢霉原钙粘附蛋白11Y抗体Anti-BAK(BAK1) Antibodyγ干扰诱导单核因子(MIGF/CXCL9)
暗褐色毛霉原钙粘附蛋白12/血管内皮钙粘蛋白2抗体Anti-BAG6 Antibodyγ干扰受体(IFN-γR)
枯草芽孢杆菌原钙粘附蛋白17抗体Anti-BAP1 Antibodyγ干扰(IFN-γ)
三叶草根瘤菌原钙粘附蛋白1抗体Anti-BAX Antibodyγ干扰(IFNγ)
杰丁毕赤酵母原钙粘附蛋白α1抗体Anti-BAK1 Antibodyγ分泌激活蛋白(PION)
深红原钙粘附蛋白α3抗体Anti-BAMBI Antibodyγ基丁(GABA)
金龟子绿僵菌原钙粘附蛋白α4抗体Anti-BAX Antibodyβ-转导重复序列包含蛋白(BTRC)
短乳杆菌原钙粘附蛋白α5抗体Anti-BAX Antibodyβ抑制蛋白2(ARRB2)
发酵假丝酵母原钙粘附蛋白α9抗体Anti-BAX Antibodyβ血小板球蛋白/β血栓环蛋白(β-TG)
侧毛壳原钙粘附蛋白α7抗体Anti-BAX Antibodyβ血小板球蛋白(β-TG)
链霉菌Streptomyces│sp. 质量规格:HPLC>98%,标准品,还原型
巴斯德毕赤酵母Pichia│pastoris 质量规格:纯度大于98%,BR
干酪乳杆菌假植物亚种Lactobacillus│casei subsp .pseudoplantarum 质量规格:>99%,BR
Laemmli加样缓冲液Plant Vitamin D2,VD2 ELISA Kit 植物维生suD2规格: 48T
Plant Vitamin D3,VD3 ELISA kit 植物维生suD3规格: 48T
Plant Vitamin D,VD ELISA Kit 植物维生suD规格: 48T
Plant Vitamin B6,VB6 ELISA Kit 植物维生suB6规格: 48T
Plant 25-Dihydroxy vitamin D3,HVD3 ELISA Kit 植物25羟基维生suD3规格: 48T
使用方法:
1. 常用筛选浓度
注意:用来筛选稳转株的工作浓度需要根据细胞类型,培养基,生长条件和细胞代谢率而变化,推荐使用浓度为50-1000μg/mL。对于第一次使用的实验体系建议通过建立杀灭曲线(kill curve),即剂量反应性曲线,来确定最佳筛选浓度。
一般而言,哺乳动物细胞50-500μg/mL;细菌/植物细胞20-200μg/mL;真菌300-1000μg/mL。
2. 杀灭曲线的建立
注意:为了筛选得到稳定表达目的蛋白的细胞株,需要确定能够杀死未转染宿主细胞的抗生素浓度,可通过建立杀灭曲线(剂量反应曲线)来实现,至少选择5个浓度。
1) 第一天:未转化的细胞按照20-25%的细胞密度铺在合适的培养板上,37℃,CO2培养过夜;注:对于需要更高密度来检测活力的细胞,可增加接种量。
2) 根据细胞类型,设定合适范围内的浓度梯度。以哺乳动物细胞为例,可设定50,100,250,500,750,1000μg/mL。先用去离子水或者PBS buffer按照1:10的比例将母液稀释到5 mg/ml,然后按照下表稀释到相应浓度的工作液。
3) 第二天:替换旧的培养基,换用新鲜配制的含有相应浓度药物的培养基。每个浓度做三个平行孔。
4) 接下来每3-4天更换新的含药物培养基。
5) 按照固定的周期(如每2天)进行活细胞计数来确定阻止未转染细胞生长的恰当浓度。选择在理想的天数(通常是7-10天)内能够杀死绝大多数细胞的浓度为稳定转染细胞筛选用的工作浓度。
3. 稳定转染细胞的筛选
1) 转染48h后,用含有适当浓度的潮霉素B筛选培养基来传代细胞(直接传代或者稀释后传代)。
注意:细胞处于活跃分裂状态时抗生素的杀伤。则当细胞过于稠密,其效率会降低。为了得到较好的筛选效果,最好将细胞稀释至丰度不超过25%
2) 每隔3-4天更换含有药物的筛选培养液。
3) 筛选7天后观察并评估细胞克隆(集落)的形成情况。集落的形成可能还需要一周或者更多的时间,这取决于宿主细胞类型,转染,以及筛选效果。
4) 挑取并转移5-10个抗性克隆于35mm细胞培养板,继续用含药物的筛选培养液维持培养7天。
5) 之后更换正常培养基培养即可。