具体步骤：

1. 在无菌条件下的冰上对新鲜离体的肿瘤组织，剔除包膜及坏死组织，无菌PBS清洗3-5次；切成约1mm3组织块；

2. 加入2mmol 的 EDTA，摇匀后放置冰上约 30-60min；

3. 离心，并加入胶原酶消化（含蛋白酶）；

4. 消化期间，置于37°培养箱。每15min摇晃一次，消化时间根据肿瘤组织来定，约1-2h；

5. 待大部分组织块消化成透明状时，用 40μm 的细胞滤网过滤细胞，收集；

6. 用培养基重悬，置于培养箱培养。

注意事项：

1. 培养基于4℃条件下可保存3-6个月。

2. 在细胞培养过程中，请注意保持无菌操作。

3. 传代培养过程中，消化时间不宜过长，否则会影响细胞贴壁及其生长状态。

4. 建议客户收到细胞后前3天每个倍数各拍几张细胞照片，记录细胞状态，便于和技术部沟通。

原代细胞培养：

原代细胞（Primary cells）：是指直接从机体取出的组织或细胞获得单个细胞并在体外进行培养的细胞。这里的组织主要指：组织器官、外周血及胚胎等。

原代细胞培养：由于原代细胞生长缓慢，繁殖一定的代数停止生长（一般10代以内）。所以一般认为：培养的原代的第1和传代到第10代以内的细胞统称为原代细胞培养。

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