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谷类及中药材中多真菌毒素检测液质质法的快速前处理方法

时间:2024-08-21      阅读:982

真菌毒素为真菌增殖时产生的次生有毒代谢产物。真菌的孢子能透过空气、风力、水流和动物等方式来传播。只要有少量蛋白质、淀粉、脂质及水分,真菌就能生长,因此谷物、果实类、玉米、花生、饲料及中药材等都可能检出真菌毒素。黄曲霉毒素具有潜在的肝毒害及致病性,其性质稳定,因此易出现在食物链中。

 

应用方案概述:

 

本篇以FaTEx-gen快速萃取净化柱进行前处理除杂,使用LC-MS/MS仪器分析谷类、花生、花生酱、豆类、饲料、中药材等基质中的11种真菌毒素,包含黄曲du素类、赭曲du素A及镰孢菌毒素类(伏马毒素、脱氧雪腐镰刀菌烯醇(呕吐毒素)、玉米赤霉毒素等),外标法定量分析。

 

样品制备流程如下:

 

秤样2g左右,加入一定体积的样品萃取溶液,高速震荡机震荡30分钟,于3500rpm离心5分钟,得到上清液。取一定体积的上清液加入FaTEx-gen 快速萃取净化柱,收集全部滤液混匀。取一定体积的滤液,氮吹回溶后上机到LC-MS/MS分析。

 

Agilent 6470液相层析串联式质谱仪搭配ZORBAX Eclipse Plus C18色谱柱,关于前处理详细步骤和仪器分析条件,欢迎索取!

 

分析结果如表所示,回收率落在81.9~112.7%范围内,CV%皆小于20,显示此为一快速稳定的检验方法。

 

实验结果如下:

 

1、真菌毒素11项药剂之添加浓度

分析物

中文名称 

添加浓度(ng/g)

Aflatoxin B1

黄曲mei素 B1

2.5

Aflatoxin B2

黄曲mei素 B2

2.5

Aflatoxin G1

黄曲mei素 G1

2.5

Aflatoxin G2

黄曲mei素 G2

2.5

Ochratoxin A

赭曲霉毒素 A

2.5

T-2 toxin

T-2毒素

5

HT-2 toxin

HT-2毒素

5

Deoxynivalenol

呕吐毒素

25

Zearalenone

玉米赤霉烯酮

25

Fumonisin B1

伏马毒素 B1

100

Fumonisin B2

伏马毒素 B2

100

 

2、谷类样品中11项霉菌毒素之回收率和变异系数

中文名称

英文名称

黃豆

花生

CV%

R%

CV%

R%

黄曲mei素 B1

Aflatoxin B1

2.3

108.5

9.0

97.5

黄曲mei素 B2

Aflatoxin B2

3.7

105.0

2.4

98.2

黄曲mei素 G1

Aflatoxin G1

2.6

105.4

2.0

102.9

黄曲mei素 G2

Aflatoxin G2

3.4

107.4

4.0

103.0

赭曲霉毒素 A

Deoxynivalenol

4.8

100.3

1.6

103.9

T-2毒素

Fumonisin B1

8.1

90.3

6.1

89.0

HT-2毒素

Fumonisin B2

13.5

81.9

5.3

96.7

呕吐毒素

HT-2 toxin

9.1

109.7

13.4

100.4

玉米赤霉烯酮

Ochratoxin A

2.8

101.9

3.8

106.0

伏马毒素 B1

T-2 toxin

5.9

110.1

5.6

112.7

伏马毒素 B2

Zearalenone

8.1

108.6

5.0

94.4

*重复性,n=3

 

结论:

1、本篇以FaTEx-gen  SPE柱净化样品,采用液质质(LC-MSMS)的仪器分析方法,检测谷类样品(黄豆及花生)之多重霉菌毒素(黄曲mei素类、赭曲du素A及镰孢菌毒素类)共11项,每次分析时间13分钟,为快速准确的检验方法。

2、 FaTEx-gen萃取净化柱可针对复杂检体基质加强净化,降低基质干扰。

3、 FaTEx-gen柱检测添加多重毒素标准品之谷类样品(添加浓度:黄曲mei素B1 Aflatoxin B1,黄曲mei素B2  Aflatoxin B2,  黄曲mei素G1  Aflatoxin G1,  黄曲mei素G2 Aflatoxin G2,赭曲霉毒素 A  Ochratoxin A2.5 ng/gT-2 toxin, HT-2 toxin5 ng/g;呕吐毒素Deoxynivalenol, 玉米赤霉烯酮 Zearalenone25 ng/g;伏马毒素 B1  Fumonisin B1,伏马毒素 B2  Fumonisin B2100 ng/g)回收率落在81.9~112.7%范围内,变异系数皆小于20,为稳定之检验方法。

4、 2015年药典中的中药材:根及根茎类:远志;果实种子类:大枣、肉豆蔻、决明子、麦芽、陈皮、使君子、柏子仁、胖大海、莲子、桃仁、槟榔、酸枣仁、薏苡仁;动物类:水蛭、地龙、全蝎、僵蚕。


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