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人结肠癌细胞HCT-116传代方法

时间:2024-05-15      阅读:65

人结肠癌细胞HCT-116传代方法
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人多发性骨髓瘤细胞RPMI-8226 1×10⁶cells T25培养瓶 RPMI1640培养基;10%胎牛血清;1%双抗 悬浮生长 提供STR鉴定报告

人结直肠腺癌细胞LS174T 1×10⁶cells T25培养瓶 MEM培养基;10%胎牛血清;1%双抗 贴壁生长 提供STR鉴定报告

人多形性恶性胶质瘤T98G 1×10⁶cells T25培养瓶 MEM培养基;10%胎牛血清;1%双抗 贴壁生长 提供STR鉴定报告

人胆管癌细胞HuCCT1 1×10⁶cells T25培养瓶 RPMI1640培养基;10%胎牛血清;1%双抗 贴壁生长 提供STR鉴定报告

人子宫内膜癌细胞Ishikawa 1×10⁶cells T25培养瓶 DMEM培养基;10%胎牛血清;1%双抗 贴壁生长 提供STR鉴定报告

人葡萄膜黑色素瘤92-1 1×10⁶cells T25培养瓶 RPMI1640培养基;10%胎牛血清;1%双抗 贴壁生长 提供STR鉴定报告

人结肠癌细胞HCT-116 1×10⁶cells T25培养瓶 McCoy’s 5A培养基;10%胎牛血清;1%双抗 贴壁生长 提供STR鉴定报告

人非小细胞肺癌细胞NCI-H3122 1×10⁶cells T25培养瓶 RPMI1640培养基;10%胎牛血清;1%双抗 贴壁生长 提供STR鉴定报告

人胰腺癌细胞HPAC 1×10⁶cells T25培养瓶 DMEM培养基;10%胎牛血清;1%双抗 贴壁生长 提供STR鉴定报告

人肝癌细胞SNU-398 1×10⁶cells T25培养瓶 RPMI1640培养基;10%胎牛血清;1%双抗 贴壁,悬浮混合生长 提供STR鉴定报告

人结肠癌细胞HCT-116传代方法

1、提前打开水裕锅,加热到37度,从液氮 罐中取出需要复苏的细胞;

2、放水裕锅快速解冻(中途不要随意拿出冻 存管直到冻存管中的液体全部融化)准备细 胞专用培养基和无菌离心管培养基需提前预 热

3、用完培稀释冻存管中的细胞悬液至离心 管中收集细胞至元南离心管,800-1100 rp/5min,取出离心管,管底可见细胞沉淀

4、去除上清,用5ml完培重悬离心管中的 细胞液至T25瓶中,十字摇晃均匀;放入培 养箱,隔天观察

传代
1、准备所需耗材紫外消毒30分钟,观察细胞密度 80%即可传代; 2、去掉旧培养基,加入3mIPBS缓冲液轻轻润洗后去 除,加入1ml胰酶,均匀覆盖细胞表面(胰酶需提前预 热)3、细胞消化至变圆,轻拍瓶身滑落.加入4ml完培终 止消化,收集消化下来的细胞至无菌离心管, 800-1100 rpm/5min 4、取出离心管,管底可见细胞沉淀,准备两个T25,各加入2.5ml培养基; 5、离心管内去上清,用5ml完培重细胞悬液,分装至 2T25瓶,十字摇晃均匀放入培养箱,隔天观察;

特殊细胞收到注意事项

部分细胞由于贴壁不牢在运输过程中发生细胞脱落,这是正常现象正确处理后都可以正常生长。 1、将培养瓶内所有培养基转入无菌离心管,离心收集细胞(1200rpm3-5min)去除旧培养基; 2、用PBS重悬细胞,将所有细胞收集到一个离心管中,再次离心(1200rpm3-5min)去除PBS3、加入1ml左右0.25%胰酶重悬细胞,混匀即可,不能吹打太多次,放入培养箱消化,根据细胞特性决定消化时间(约1~2分钟) 4、消化好后,用移液枪轻轻吹打细胞悬液,使细胞团分散,迅速加入3-5ml培养基混匀以终止消化,离心 (1200rpm3-5min) 去除胰酶; 5、加入5ml左右的细胞相应的培养基混匀,按比例接入无菌培养瓶/皿中; 6、显微镜下观察看细胞是否成均匀分散的单颗细胞,若有3-5个成团的小细胞团可不用重新消化,使之贴壁后待细胞生长稳 定后再消散细胞。


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