中文名称：人绒毛膜促性腺激素（HCG）ELISA试剂盒

规格：96T

样本：血清或血浆

品牌：美国Biocheck原装

货号：BC-1027

Biocheck人绒毛膜促性腺激素（HCG）-ELISA试剂盒说明书

一、用途：

本试剂盒用于人血清绒毛膜促性腺激素（HCG）的定量测定。

二、试剂盒的组成

1．包被有抗体的微孔板：96孔，1块。

2．零缓冲液：13mL。

3．酶联试剂：18mL。

4．参照标准品：1套（0，5，20，50，150，300mIU/mL）。

5．TMB试剂：1lmL。

6．终止液（1N HCL）：1lmL。

7. 洗涤浓缩液（20X）：50ml，1瓶.

三、自备材料

1．精密吸管：50µL，100µL和150µL。

2．一次性吸头。

3．蒸馏水。

4．涡旋混合器或等同物。

5．吸水纸或纸巾。

6．坐标纸。

7．酶标仪，能在450nm处测定吸收值时，要求谱宽≤10nm，光密度值（O.D.）在0~2之间或更大些。

四、样品的采集和制备

血清由全血样品制备，用于本试剂盒的血清样品须无任何添加物。

五、试剂盒的保存

    未启封的试剂盒须保存在2~8℃下；微孔板存放在有干燥剂的密封袋里，以尽量减少其在潮湿空气中的暴露；已启封的试剂盒在上述保存条件下，在有效期内保持稳定。

六、试剂的准备

在检测前使所有试剂恢复到室温（18~25℃，下同）。

制备洗涤缓冲液：按1：19的比例稀释洗涤浓缩液（20X），即50ml洗涤浓缩液（20X）用蒸馏水或去离子水稀释至1000ml，已稀释好的洗涤液在2-8℃下可保存一个月，用前混匀。

七、检测步骤

1．把所需数量的微孔固定在微孔架上。

2．分别取50µL标准品、样品和对照品加入相应的微孔中。

3．取100µL HCG零缓冲液分别加入到每个微孔中。

4．充分混合30秒钟（此步至关重要）。

5．室温温育30分钟。

6．翻转微孔板，弃掉温育混合物。

7．用稀释的洗涤缓冲液（1X）冲洗5次。

8．在吸水纸或纸巾上扣击微孔板以*除去微孔板中残余的水滴。

9．向每个微孔中分别加入150µL酶联试剂，轻轻混合10秒钟。

10．室温温育15分钟。

11．翻转微孔板，弃掉温育混合物。

12．用稀释的洗涤缓冲液（1X）冲洗5次。

13．在吸水纸或纸巾上扣击微孔板以*除去残余的水滴。

14．取100µL TMB试剂分别加入到每个微孔中，轻轻混合10秒钟。

15．室温暗处温育20分钟。

16．向每个微孔中加入100µL终止液终止反应。

17．轻轻地混合30秒钟（此步至关重要，要确保蓝色全部变成黄色）。

18．在15分钟内用酶标仪在450nm处读出光密度值。

八、结果计算

    在酶标仪上读出每套参照标准品、样品的平均吸收值（A450）。以每个参照标准品的平均吸收值作纵轴（Y），浓度值（mIU/mL）作横轴（X）在坐标纸上绘制出标准曲线。根据每个样品的平均吸收值在标准曲线上找出相应的HCG浓度值（mIU/mL）。

九、标准曲线实例

在450nm处测得的光密度值在Y轴上，其相应的HCG浓度值在X轴上，得出典型的标准曲线。此标准曲线仅用于示例，不能用于计算未知样品。每个使用者应根据自己的数据制做标准曲线。

十、期望值和灵敏度

每个实验室根据当地人群建立自己的正常值范围。健康男性和未怀孕健康女性的血清中通常检测不到HCG。怀孕一周后女性血清的HCG浓度增至5~50mIU/mL，在*周HCG浓度按指数增长，前三个月达到zui大值为250，000~500，000mIU/mL，可测得本试剂盒的HCGzui低浓度约为2.0 mIU/mL。