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HEK-293-6e细胞培养

时间:2014-04-11      阅读:2003

HEK-293-6e细胞培养

使用F17+L谷氨酰胺培养液,37℃ 下置于5%CO2培养箱中。待细胞融合至80%,用0.25%胰酶消化传代后接种(细胞密度5 XlO4)于培养瓶或孔板,待细胞融合至约70%后用于实验。

细胞培养方法如下: 

1.贴壁细胞细胞换液:

1)吸光培养瓶中的培养液。

2)用1xD-hank`s洗一次。

3)加入适量的新鲜培养液,接种于新的培养瓶内,放入培养箱内培养。

2.悬浮细胞换液

1)吸光培养瓶中的培养液放入15ml离心管中离心1500rpm 5min。

2)细胞沉淀用1xD-hank`s洗一次。

3)加入适量的新鲜培养液,接种于新的培养瓶内,放入培养箱内培养。

3.细胞传代(贴壁细胞传代采用胰酶消化法,常用消化液为0.25%的胰蛋白液)

1)吸光培养瓶中的培养液。

2)用1xD-hank`s洗一次。

3)加入0.5ml-1ml 0.25%的胰蛋白酶液(以消化液能覆盖整个瓶底为准)。

4)静止2-10分钟(显微镜下动态监测)。

5)吸去胰蛋白酶液,加入培养基。

6)用吸管吸取瓶内培养液,反复吹打瓶壁细胞,形成细胞悬液。

7)吸取1/5-1/10细胞悬液接种于新的培养瓶内。

8)加入适量的新鲜培养液,接种于新的培养瓶内,放入培养箱内培养。

4.细胞的冻存:

1)预先配制冻存液:90%胎牛血清+10%DMSO

2)取对数期生长细胞经胰酶消化后加入培养液终止胰酶反应,离心(1500rpm 5min)去上清留沉淀加适量冻存液,用吸管吸打制成细胞悬液(1 XlO5-5X106/ml)

3)加入1ml细胞悬液于冻存管中,密封后标记冻存细胞名称和冻存日期。

5.细胞复苏:

1)从液氮中取出冻存管,迅速投入37度-38度水浴中

2)使其融化5min内用培养液稀释至原液体的10倍以上,低速离心1500rpm 5min

3)去上清,加入培养液,细胞转入培养器皿中进行培养

 

 

如果培养基还未到,我们建议离心,离心后分别收集细胞和培养基。取5ML培养基重悬细胞沉淀。接种于T25培养瓶中。

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