司法部发布2016版血液中乙醇的测定顶空气相色谱法
SF/Z JD代替SF/Z JD
血液中乙醇的测定
顶空气相色谱法
1 范围
本技术规范规定了血液中乙醇的顶空气相色谱测定方法。
本技术规范适用于血液中乙醇的定性及定量分析。
本技术规范的方法检出限为0.01mg/mL；定量下限为0.05mg/mL。
2 规范性引用文件
下列文件对于本技术规范的应用是*的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本技术规范。凡是不注日期的引用文件，其版本（包括所有的修改单）适用于本技术规范。
GB/T 6682  分析实验室用水规格和试验方法（GB/T 6682-2008，ISO 3696：1987，MOD）
GA/T 122  毒物分析名词术语
3 原理
本法利用乙醇的易挥发性，以叔丁醇为内标，用顶空气相色谱火焰离子化检测器进行检测，经与平行操作的乙醇对照品比较，以保留时间进行定性分析；以峰面积为依据，用内标法定量。
4 试剂和材料
除另有说明外，水为GB/T 6682规定的二级水。
4.1 乙醇
色谱纯。
4.2 乙醇标准溶液
精密称取适量乙醇，用水配成10.0mg/mL乙醇标准储备溶液。储备液在冰箱中冷藏密闭保存，有效期为6个月。试验中所用其它浓度的标准溶液均从上述储备液稀释而得，在冰箱中冷藏密闭保存，有效期为3个月。
4.3 叔丁醇
色谱纯。
4.4 叔丁醇溶液
精密称取适量叔丁醇，用水配成5.0mg/mL叔丁醇储备液。储备液在冰箱中冷藏密闭保存，有效期为12个月。将储备液用水稀释，得40.0μg/mL叔丁醇内标工作液，在冰箱中冷藏密闭保存，有效期为6个月。
5 仪器 
5.1 气相色谱仪
配火焰离子化检测器（FID）。
5.2 顶空进样器
配1mL定量进样环。
5.3 样品瓶
10mL，顶空自动进样器用。
5.4 硅橡胶垫
5.5 铝帽
5.6 密封钳
5.7 精密移液器
5.8 自动稀释仪
6 测定步骤
6.1 样品处理
用精密移液器或自动稀释仪取待测血液0.10 mL及0.50 mL 40.0μg/mL 叔丁醇内标工作液，加入样品瓶内，盖上硅橡胶垫，用密封钳加封铝帽，混匀。
6.2 测定
6.2.1 顶空气相色谱测定参考条件
a） 色谱柱（1）：DB-ALC1（30m0.32mm1.8m）石英毛细管柱或相当者；
柱温：恒温40C； 
色谱柱（2）：DB-ALC2（30m0.32mm1.2m）石英毛细管柱或相当者；
柱温：恒温40C；
b） 载气：氮气，纯度≥99.999%，流速8mL/min；
c） 进样口温度：150C；
d） 检测器温度：250C；
e） 加热箱温度：65C；
f） 定量环温度：105C；
g） 传输线温度：110C；
h） 气相循环时间：3.5min；
i） 样品瓶加热平衡时间：10.0min；
j） 样品瓶加压时间：0.10min；
k） 定量环充满时间：0.10min；
l） 定量环平衡时间：0.05min；
m） 进样时间：1.00min。
6.2.2 定性测定
样品溶液按照顶空气相色谱测定条件测定，以叔丁醇为内标，记录色谱峰的保留时间。将待测样品色谱峰的保留时间与乙醇标准对照品的保留时间比较，相对误差在2%内，空白对照样品内标物色谱峰正常而无乙醇的色谱峰，一般可以认为待测样品中含有乙醇；必要时，选择不同的色谱条件或用气相色谱-质谱法确证。如果内标物色谱峰正常，而无乙醇的色谱峰时，可认为检验结果为阴性。乙醇对照品和内标气相色谱图，参见附录A。
6.2.3 定量测定
本方法采用内标法－校准曲线法或内标法－单点校正法定量测定。
6.2.3.1  内标法－校准曲线法
采用内标-校准曲线法测定（见附录B）。将乙醇对照品溶液进样，以乙醇和内标峰面积比为纵坐标，乙醇对照品工作溶液浓度为横坐标绘制标准曲线，用标准曲线对待测样品进行定量，所测样品中乙醇的浓度值应在线性范围内。
6.2.3.2  内标法－单点校正法
待测血液样品乙醇浓度在标准溶液浓度的±30%内可用单点法定量。
6.3 平行试验
按以上步骤对同一待测样品进行平行试验。
单柱单检测器两份样品测定结果按两份样品的平均值计算，双样相对相差不得超过10％。双样相对相差按式（1）计算：
                                    | C1 - C2|
双样相对相差（%） =   100     ………………………………（1）
                                      C

式中：
C1、C2两份样品平行定量测定的结果；
C 两份样品平行定量测定结果的平均值(C1+C2)/2。
双柱双检测器两份样品测定结果的相对标准偏差RSD（%）若不超过5％时，结果按两份样品结果的平均值计算。
7 结果计算
血液中乙醇浓度测定采用内标法－校准曲线法定量或按式(2)计算：
                                 A Ai′c          
                   C =          …………………………………（2）
                                  A′Ai             

式中：
C血液样品中乙醇浓度，单位为毫克每毫升(mg/mL)；
A血液样品中乙醇的峰面积；
A′标准溶液中乙醇的峰面积；
Ai′标准溶液中内标物的峰面积；
Ai血液样品中内标物的峰面积；
c标准溶液中乙醇浓度，单位为毫克每毫升(mg/mL)。

附录A
（资料性附录）
乙醇对照品和内标气相色谱图
A.1 按色谱柱（1）条件得乙醇对照品和内标气相色谱图，见图A.1。

A.2 按色谱柱（2）条件得乙醇对照品和内标气相色谱图，见图A.2。

附录B
（资料性附录）
校准曲线
配制乙醇浓度为0.10、0.20、0.50、0.80、1.00、2.00、3.00mg/mL的水溶液，按6.1和6.2项下分析，每一浓度点取2份，以乙醇与内标叔丁醇的峰面积比对乙醇浓度做标准曲线。

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