提取动物关节软骨组织总RNA

实验目的

       研磨破碎软骨组织（大鼠膝关节软骨），提取其总RNA。

实验原理

       充分磨碎软骨样品（大鼠膝关节软骨），再用相关试剂提取其总RNA。

实验材料和器具

样品：大鼠膝关节软骨

仪器：多样品组织研磨仪（上海净信，Tissuelyser-24）

耗材：研磨罐（上海净信，***ml），研磨珠（上海净信，***mm，***颗）

试剂：液氮若干

实验步骤

1.研磨软骨组织

1.1 取适量大鼠膝关节软骨组织，剪切成约***立方厘米小块；

1.2 将小块软骨组织置于液氮中***分钟或放入***度冰箱冷冻30分钟；

1.3 将样品和研磨珠放入研磨罐中，盖好盖子；

1.4 将装好样品及钢珠的研磨管，放入已经在***度冰箱预冷好的适配器中，加入变性液，β-巯基乙醇；

1.5 将适配器放入净信研磨仪中，在***hz条件下，研磨***min，可得到匀浆状的软骨组织；

2.总RNA提取

2.1 冰水浴下，加酸性水饱和酚，摇匀，加醋酸钠，异戊醇混合液，冰水浴上***min；

2.2 ***℃下，离心，取上清液，加异戊醇混合液，离心取上清，加异丙醇，***℃下沉淀，离心，得到凝胶状RNA和蛋白多糖混合沉淀，加无RNA酶水，溶解得胶状溶液；

2.3 取胶状溶液用plant RNAout试剂盒的RNA提取步骤得到总RNA沉淀，取沉淀，乙醇洗涤后用无RNA酶水溶解沉淀，即得关节软骨组织总RNA溶液。

实验结果

       采用本实验方法提取的动物关节软骨组织总RNA的收率高，并且纯度高、质量、完整性好，可以满足分子生物学研究应用。

                     总RNA甲醛变性胶电泳结果

          Ⅱ型胶原PCR扩增产物电泳结果