农杆菌感受态细胞制备实验
时间：2013-03-02 阅读：1648
- 氯化钙法
- 电转农杆菌感受态
| 实验方法原理 | 在基因工程操作中，感受态细胞的制备和质粒的转化是一项基本技术。感受态是细菌细胞具有的能够接受外源DNA的一种特殊生理状态。农杆菌的感受态可用CaCl2处理而诱导产生。将正在生长的农杆菌细胞加入到低渗的CaCl2溶液中，0℃下处理便会使细菌细胞膜的透性发生改变，此时的细胞呈现出感受态。制备好的农杆菌感受态细胞迅速冷冻于-70℃可保存相当一段时间而不会对其转化效率有太大的影响。 |
|---|---|
| 实验材料 | |
| 试剂、试剂盒 | |
| 仪器、耗材 | |
| 实验步骤 | |
农杆菌转化注意事项： 1. 感受态尽量新，而且不要太浓（0.3-0.5）； 2. CaCl2尽量新； 3. 涂板只加Kan 50mg/L，等出了菌落再加到100mg/L； 4. pBI121本身拷贝数低，转化子可能长的就慢些； 5. LB营养没有YEP丰富，其实关系不大； 6. 4404不好用，能用105就不要用4404，105转化效率通常比4404好的多 。
发表于2006-08-01 23:17
从农杆菌中可以抽出质粒，但做不了酶切试验，原因是： 1. 量太少，主要是菌裂解困难，以及农杆菌双元载体携带的是低拷贝复制子； 2. 杂质太多，酶切后呈现smear带，无法判断是否有目标基因。