共聚焦爬片培养贴壁细胞实验步骤

实验准备：
1. 提前半小时在37°C预热培养基、PBS、胰酶。
2. 准备2mL和10mL移液管、1.5mL离心管、等相关材料。
实验方法：
1.从培养箱中取出，镜下观察细胞状态：密度、细胞形态、贴壁情况等。
2.在超净台内，放入预热好的培养基、PBS和胰酶。点酒精灯，烧培养皿口，将原培养基吸掉。
3.加入适量PBS至培养皿底部，前后轻柔摇匀，清洗细胞。
4.去掉PBS，加入适量胰酶，静置5-10min（时间和量根据不同细胞调整）。注意，胰酶需要预先调配好。
5.终止消化：若消化下来，在底部加适量培养基（根据观察的细胞密度决定）终止消化，并用枪轻柔吹打多次，将壁上剩余细胞吹打下来，均匀后取少量计数。
6.根据需要的量稀释细胞，细胞悬液滴满共聚焦爬片表面后，放入培养箱，30分钟左右细胞附着到爬片后，再沿内壁添加培养基，继续培养。
7.细胞培养好后，吸取掉废液，用镊子夹在支架侧面，取出支架。
8.双手捏住支架两侧轻轻一拉即可轻松取出爬片，继续接下来的培养实验。

注意事项：
1.操作时需注意无菌操作，尽量避免污染。
2.确保培养皿的液体不要沾到瓶口，每次打开瓶口都需要用酒精灯消毒。
3.因为贴壁细胞更脆弱，因此放入培养皿中的液体都需要37°C 预热。
4.共聚焦爬片倾斜30°以上，轻拉，防止拉开一瞬间爬片掉落，防止爬片破裂。
5.共聚焦爬片为一次性产品，不可重复使用，爬片区分正反面，拆开即用！