T4 DNA Ligase T4噬菌体DNA连接酶 Promega M1801S 上海桥星生化试剂
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T4 DNA Ligase T4噬菌体DNA连接酶
产品编号 规 格 价 格
T8400-100 100u 535.00
说明:T4噬菌体DNA连接酶主要催化两条DNA链上相邻的5’磷酸基和3’-Qiang基之间形成磷酸二酯键。它的主要用途是连接带匹配粘端的DNA分子,或使平端的双链DNA分子互相连接或与合成接头相连接。也可催化DNA与RNA之间以及少数RNA之间的连接,但不能催化单链DNA之间的连接。
单位定义:0.01Weiss单位的T4 DNA连接酶可以在16℃下反应20分钟,连接95%的1μgλDNA-HindⅢ的分解物。
注意:一个Weiss单位的T4 DNA连接酶相当于核酸外切酶测定中的0.2单位或60个粘性末端(New England Biolabs)
存储缓冲液:10mM Tris-HCl(pH7.5 25℃),50mM KCl,
1mM DTT,0.1mM EDTA和50%glycerol。
10×反应缓冲液:300mM Tris-HCl(pH7.8 25℃),
100mM MgCl2,100mM DTT,10mM ATP
质量控制:
1 活性:大于3Weiss单位/微升。
2 蓝白克隆鉴定:12Weiss单位T4 DNA连接酶与3μg经内切酶酶切产生的5’或3’粘性末端DNA在4℃下,反应16小时后转化到大肠杆菌JM109培养,白色菌落小于总菌落数的2%;12 Weiss单位T4 DNA连接酶与3μg经内切酶酶切产生的钝性末端DNA在4℃下,反应16小时后转化到大肠杆菌JM109培养,白色菌落小于总菌落数的5%。
3 核酸内切酶测定:20Weiss单位酶与1μg超螺旋质粒DNA在37℃下反应16小时,DNA的电泳图谱不发生变化。
4 单链和双链DNase测定:20Weiss单位酶与50ng同位素标记的单链或双链DNA反应16小时,单链DNA的释放量小于2%,双链DNA的释放量小于1%。
5 RNase测定:37℃时,20Weiss单位酶与50ng 3H-RNA保温5小时,释放量小于1%。
6 蛋白纯度:SDS PAGE 检测纯度≥90%。
储存条件:−20℃
From Promega M1801S
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