生化培养箱广泛应用于多个领域，其中zui常使用的两种方法是多管发酵法与滤膜法，下面我们介绍一下在这两种应用中有哪些注意事项。

1.培养温度的要求 总大肠菌群中的细菌除生活在肠道中外，在自然环境中的水与土壤中也经常存在，但此等在自然环境中生活的大肠菌群培养的zui合适温度为25℃左右，如在37℃培养则仍可生长，但如将生化培养箱培养温度再升高至44.5℃，则不再生长，而直接来自粪便的大肠菌群细菌，习惯于37℃左右生长，如将生化培养箱培养温度升高至44.5℃仍可继续生长。因此，可用提生化培养箱高培养温度的方法将自然环境中的大肠菌群与粪便中的大肠菌群区分，两种方法也都基于此理。将接种好的样品或装有滤膜的培养基放入生化培养箱时，生化培养箱箱内温度一定要达到所要求的温度(44.5±0.5℃)时，方可放入。如用恒温水浴箱时，其水面要高于接种物面，放滤膜的培养皿要沉到水浴箱底部。

2.加氯水样的处理 经氯处理消毒过的水样，水中含有一定量的余氯，使大肠菌群处于受损或受抑制状态，在采集水样时应提前在生化培养箱采样瓶中加硫代硫酸钠，硫代硫酸钠可以脱氯，使受损的细菌得以复苏与修复，从而避免出现计数结果偏低甚至假阴性的现象。此外余氯对滤膜法培养的细菌其抑制作用尤为明显，所以抽滤时应对水样进行大量无菌水稀释，以减少余氯的残留。

3.样品的保存生化培养箱采样用的容器使用前应盖好瓶盖，用牛皮纸将瓶盖和瓶颈处包裹好，置干燥箱160℃-170℃干热灭菌2h，或用高压蒸汽灭菌器121℃灭菌15min。采样后水样的正确保存也很重要，如保存不当可使样品中的大肠菌群细菌死亡或在一定条件下再生长，这些都将影响检测结果的准确性。检测室接到水样后，应立即检测，如因故不能检测时，应立即将样品置于冰箱内(2℃-10℃)并于2小时内检测。

4.培养物质的制备与保存

⑴.多管发酵法所使用的培养液在分装于各生化培养箱发酵管中后，应将发酵管尽快放于高压蒸汽灭菌器中，在115℃灭菌20min(注意：这个温度也应控制好，既达到灭菌的作用，还要防止培养物质分解流失)，然后贮存于冰箱或暗处备用。

⑵.滤膜法所采用的m-fc培养基多使用外购的成品，培养基中苯胺蓝的纯度和质量往往影响菌落的颜色，因此，无菌包装的成套培养基在使用前，先接种典型粪大肠菌，以观察对比菌落的颜色，来鉴定其稳定性。

5.结果统计

⑴.多管发酵法的结果是根据不同接种量的发酵管所出现阳性结果的数目，从mpn表中查得相应的mpn指数，来计算每升水中粪大肠菌群细菌的mpn值。mpn是“most probable number”的缩写，指zui大可能数，它是根据统计学理论，估计水体中的菌群密度和卫生质量的一种方法，所以准确判断不同接种量发酵管的阳性数是非常重要的，否则将导致较大偏差。

⑵.滤膜法的结果是计数滤膜上呈蓝或蓝绿色的菌落，来计算出每升水样中的粪大肠菌群数。所以为便于计数，减少误差，理想的水样体积是一片滤膜上生长20-60个粪大肠菌群菌落。

多管发酵法与滤膜法是生化培养箱在使用中zui常用到的，掌握这些注意事项可以让我们在使用中减少错误的发生。