SD大鼠肝内胆管上皮细胞，使用方法；
 

　　1、您收到细胞后，请按照以下方法进行操作：
 

　　取出25cm2培养瓶，75%酒精擦拭培养瓶，拆下封口膜，放入37℃，5%CO2细胞培养箱中静置3-4小时以稳定细胞状态，然后换用新鲜*培养液继续培养或进行传代。
 

　　2、细胞传代：
 

　　1)细胞生长至覆盖培养瓶的80%面积时，弃25cm2培养瓶中的培养液，用PBS清洗细胞一次；
 

　　2)添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml至培养瓶中，倒置显微镜下观察，待细胞回缩变圆后加入*培养液终止消化，再轻轻吹打细胞使之脱落，然后将悬液转移至15ml离心管中，1000rpm离心5min；
 

　　3)弃上清，沉淀细胞用12ml*培养基重悬，然后按1:2比例进行分瓶传代，后放入37℃，5%CO2细胞培养箱中培养；
 

　　4)待细胞*贴壁后，观察培养结果，之后进行换液培养或传代。
 

　　3、细胞冻存：
 

　　1)细胞生长至覆盖培养瓶的80%面积时，弃25cm2培养瓶中的培养液，用PBS清洗细胞一次；
 

　　2)添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml至培养瓶中，倒置显微镜下观察，待细胞回缩变圆后加入*培养液终止消化，轻轻吹打细胞使之脱落，然后将悬液转移至15ml离心管中，1000rpm离心5min；
 

　　3)用适量的冻存液(FBS：DMSO=9 ：1)重悬细胞，并放置于冻存管中；
 

　　4)先将细胞冻存管放置于-20℃ 1.5h，然后将其移入-80℃过夜，24h后转入液氮中进行长期保存。使用程序降温盒可直接放入-80℃。
 

　　4、细胞复苏：
 

　　1)从液氮中取出细胞冻存管(注意：佩戴防爆管面具)，快速将其置入37℃水浴中解冻，直至冻存管中无结晶，然后用75%的酒精擦拭冻存管外壁；
 

　　2)将冻存管中的细胞移至含5ml*培养基的15ml离心管中， 1000rpm离心5min；
 

　　3)弃上清，沉淀用5ml*培养基重悬，接种25cm2培养瓶，于37℃，5%CO2细胞培养箱中培养；
 

　　4)第二天，换用新鲜*培养基继续培养。
 

　　SD大鼠肝内胆管上皮细胞，细胞传代：收到细胞后，请对细胞培养瓶外表进行消毒，将细胞置于培养箱中进行 1-2 小时的缓冲，待细胞恢复基本生长状态后，进行后续细胞实验。在倒置显微镜下观察整个细胞生长情况：
 

　　(一)细胞未长至 85%时，用 75%酒精喷洒整个瓶消毒后放到生物操作台内，严格无菌操作，打开细胞培养瓶，若培养瓶上无特殊标注，吸去剩余培养液，只留 6-8ml 培养液继续培养。
 

　　(二)细胞已长满(达 85-95%)。即可进行传代，具体步骤如下：
 

　　1.弃去培养液，用 PBS 洗涤 1-2 次，
 

　　2.加入 1.0ml 胰酶消化液，37℃消化，显微镜下观察细胞消化情况，若细胞回缩变圆、透亮、轻拍甁壁呈流沙样脱落，则迅速拿回操作台，加入双倍的含 10%血清的*培养液，终止消化并轻轻吹打细胞，使其变成单细胞悬液，
 

　　3.将细胞收集于离心管中离心 1000rmp/5min，弃上清，轻弹管底，将细胞弹散，
 

　　4.加入新鲜培养液重悬细胞，进行传代、冻存，
 

　　5.如果没有特别说明，建议收到细胞后的次传代比例为 1:2。