葡聚糖凝胶使用方法使用方法和洗脱溶剂的选择
时间:2021-11-05 阅读:6600
葡聚糖凝胶LH-20通过葡聚糖凝胶 G-25的羟丙基化制备,并且专门适合用于有机溶剂分离嗜脂性分子,天然产物在有机溶剂中的纯化,例如类固醇,萜类化合物,脂质和低分子量肽。
葡聚糖凝胶 LH-20 的使用方法:
将干粉浸泡于 60-70%乙醇中(充分搅拌),洗去可能存在的残留物,抽干然后湿态不间隙装柱,绝对不能出现凝胶断层(否则要重新装柱),动态用一倍柱体积的 60-70%乙醇淋洗,再用水洗净乙醇即根据自己选用洗脱液平衡层析柱至少两个柱体积直到基线变得平稳为止,如改变溶剂应该注意凝胶在新溶剂中的溶胀性质,并根据性质确定柱高。如使用相同的溶剂,在以后的层析中柱平衡可以省略。
葡聚糖凝胶 LH-20 洗脱溶剂:
葡聚糖凝胶 LH-20 洗脱溶剂分为两类:反相和正相两种。用得最多的是反相溶剂洗脱,以甲醇——水系统最为常见,先用水,逐渐增加甲醇比例,最后用 100%甲醇冲柱。正相系统以氯仿——甲醇最为常见,先用 50%氯仿——甲醇,逐渐增加甲醇比例,最后用 100%甲醇冲柱。
样品的处理和洗脱溶剂的选择:
如果样品极性大,选用反相溶剂洗脱(甲醇——水),样品用最少体积的甲醇——水(尽可能甲醇少一些)溶解,过滤后,湿法上样(必须要进行过滤!否则把葡聚糖凝胶 LH-20 堵塞,就必须将葡聚糖凝胶 LH-20 的柱头部分弃去, 造成不必要的浪费) 。如果样品极性小, 这选用正相溶剂洗脱 (氯仿——甲醇) ,样品用最少体积的氯仿——甲醇溶解,过滤后,湿法上样。