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凝胶过滤填料的作用和层析原理

时间:2022-06-06      阅读:2282

  凝胶过滤填料的分离原理主要有两方面:以凝胶过滤作用为主,兼具反相分配的作用(在反相溶剂中)。因为凝胶过滤作用,所以大分子的化合物保留弱,先被洗脱下来,小分子的化合物保留强,后出柱。自GE的葡聚糖凝胶G25问世以来,到现在已经有65年的历史,G系列的填料也是古老和经典的凝胶排阻系列填料,这种填料大的缺点就是不耐压(尤其是G-100和G-200,流体静力压要求非常低)和分辨率差,G25填料一般用于透析和较低分子量多糖或蛋白分离,一般情况G25填料溶胀需要16-24h,溶胀好后的填料从色谱柱侧面看有一种多糖*的乳光。
  凝胶过滤填料层析原理:
  凝胶过滤:依赖于分子的大小和形状。
  吸附层析:依赖于被分离化合物与凝胶之间的氢键数量和质量。
  分配层析:依赖于分离化合物在流动相(溶剂)和固定相(凝胶)之间的分配,这主要由样品的极性和溶剂的极性决定的。
  凝胶过滤填料可应用于胆固醇、脂肪酸、激素、维他命、天然产物的分析。Sephadex LH-20的分离原理主要有两方面:以凝胶过滤作用为主,兼具反相分配的作用(在反相溶剂中)。因为凝胶过滤作用,所以大分子的化合物保留弱,先被洗脱下来,小分子的化合物保留强,后出柱。如果使用反相溶剂洗脱, Sephadex LH20对化合物还起反相分配的作用,所以极性大的化合物保留弱,先被洗脱下来,极性小的化合物保留强,后出柱。如果使用正相溶剂洗脱,这主要靠凝胶过滤作用来分离。
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