高效薄层层析板制备步骤和方法
时间:2022-07-25 阅读:2210
高效薄层层析板是用薄层层析硅胶,用适当的粘合剂充分混合均匀后,经脱气处理使用进口涂布机械均匀地涂布在洁净的玻璃板上,晾干后,置于恒温鼓风干燥箱中经105摄氏度活化半个小时而成。板面平整光洁,薄层均匀牢固,无龟裂、气泡、掉粉等现象。
高效薄层层析板的特点以及制备:
高效薄层层析板就是我们通常所说的硅胶板,要了解制作与操作方法必须先知道:其原理;薄层层析法是一种微量而快速的分析方法,操作容易,设备要求低,但对于每一种被分离的物质都需要各自独立的方法,TLC主要应用于氨基酸、多肽、糖脂、核苷酸和生物碱类多种物质的分离和鉴定。
1.样品的溶解:将薄层层析板样品溶于展开剂极性相近、挥发性高的有机溶剂。
2.点样:控制上样量,点样基线距底边2.0 cm,控制样点直径(5 mm)及点间距离(1-1.5 cm),避免因扩散而影响检测(下图),点样时必须注意勿损伤薄层表面。
3. 展层:展层容器必须密封,提前加入展开溶剂,使溶剂蒸气达到平衡。展开剂不能高于上样点,否则,无法求得Rf值和准确判断粗产物中各组分在薄层板上的相对位置。
4. 高效薄层层析板展开剂的选择条件:有良好的溶解性、使待分离组分间分开、待测组分的Rf值在0.2~0.8之间、不与待测组分或吸附剂发生化学反应、沸点适中,黏度较小、展开后组分斑点圆且集中、混合溶剂用新鲜配制。
5. 边缘效应:边缘效应是样品在层析时,薄层板两边的斑点比中间斑点移动快,并向两边偏斜。其原因是用混合溶剂展开时,极性较弱和沸点较低的溶剂在薄层板两边沿处较易挥发,使薄层板上的展开剂比例不一,而出现边缘效应,解决边缘效应zui有效的方法是剪去薄层板浸入展开剂一端的两角。