小鼠肝炎病毒抗体（MHV-Ab） 试剂盒使用方法
时间：2022-09-02 阅读：659
小鼠肝炎病毒抗体实验原理：
本试剂盒应用双抗原夹心法测定标本中小鼠肝炎病毒抗体（MHV-Ab）水平。用纯化的抗原包被微孔板，制成固相抗原，往包被的微孔中依次加入肝炎病毒抗体（MHV-Ab），再与HRP标记的抗原结合，形成抗原-抗体-酶标抗原复合物，经过*洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的肝炎病毒抗体（MHV-Ab）呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中小鼠肝炎病毒抗体（MHV-Ab）浓度。
小鼠肝炎病毒抗体试剂盒组成:
1 | 30倍浓缩洗涤液 | 20ml×1瓶 | 7 | 终止液 | 6ml×1瓶 |
2 | 酶标试剂 | 6ml×1瓶 | 8 | 标准品（200 ng/L） | 0.5ml×1瓶 |
3 | 酶标包被板 | 12孔×8条 | 9 | 标准品稀释液 | 1.5ml×1瓶 |
4 | 样品稀释液 | 6ml×1瓶 | 10 | 说明书 | 1份 |
5 | 显色剂A液 | 6ml×1瓶 | 11 | 封板膜 | 2张 |
6 | 显色剂B液 | 6ml×1/瓶 | 12 | 密封袋 | 1个 |
小鼠肝炎病毒抗体标本要求 :
1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融
2．不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。
小鼠肝炎病毒抗体操作步骤:
1. 标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。
100ng/L | 5号标准品 | 150μl的原倍标准品加入150μl标准品稀释液 |
50ng/L | 4号标准品 | 150μl的5号标准品加入150μl标准品稀释液 |
25ng/L | 3号标准品 | 150μl的4号标准品加入150μl标准品稀释液 |
12.5ng/L | 2号标准品 | 150μl的3号标准品加入150μl标准品稀释液 |
6.25ng/L | 1号标准品 | 150μl的2号标准品加入150μl标准品稀释液 |
2. 加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl，待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品最终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。
3. 温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
4. 配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用
5. 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。
6. 加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。
7. 温育：操作同3。
8. 洗涤：操作同5。
9. 显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色10分钟.
10. 终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。
11. 测定：以空白孔调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。
小鼠肝炎病毒抗体计算:
以标准物的浓度为横坐标，OD值为纵坐标，在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式，将样品的OD值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。