沪鼎选择多肽免疫原的绝招
时间:2014-08-29 阅读:1331
【沪鼎选择多肽免疫原的绝招】
1. 从天然蛋白质的可及区中选择肽免疫原。这些区域通常暴露在与水相环境接触的蛋白质表面上。利用计算机程序为蛋白质中的各个氨基酸分配“亲水性指数”,然后绘图。这样便可观察到亲水区域。
2. 大多数蛋白质数据库系统内都含有亲水性分析程序,包括:ProtScale、PlotStructure、PepPlot。
3. 确保正确的物种和蛋白质序列已经过鉴定。
4. 使用OMIM和LocusLink来建立结构域。其他蛋白质中存在的结构域,应当避免在免疫原的序列中出现,因为它们会增加交叉反应的可能性。另外,抗体可能无法结合某些蛋白质区域,即球状蛋白质中心或跨膜区。
5. 避免存在多个谷氨酰胺残基,因为这会造成多肽间发生氢键结合。
6. 尝试加入脯氨酸和酪氨酸残基。这些残基能够使免疫原形成天然蛋白质中可能存在的某些结构基元。
7. 避免已知区域被翻译后修饰,因为可能会掩盖抗体识别位点。
8. 将末端半胱氨酸残基加入到肽序列中,则可以利用Sulfo-SMCC交联剂将肽偶联到载体蛋白。
9. 如果合成的抗体需要亲和纯化,则还可利用末端半胱氨酸残基将此肽链直接固定到SulfoLink亲和基质上。
10. 避免存在复杂区域。
11. 避免存在多个谷氨酰胺残基,因为这会造成多肽间发生氢键结合。
在选择的过程中,上海恒远生物提出了一些需要注意的地方:如果此肽链来源于蛋白质的N端,则应当将半胱氨酸加入到肽链的C端,反之亦然。如果此肽链来源于内部蛋白质序列,则可随意分配半胱氨酸。