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我们可以根据您的应用需要,比如在检测范围、种属以及灵敏度等方面有特殊要求,而量身定制检测试剂盒,有效控制检测试剂成本。并可提供免费代测。
二、ELISA检测概述
ELISA(酶联接免疫吸附反应分析)是以免疫学反应为基础,将抗原、抗体的特异性反应与酶对底物的高效催化作用相结合起来的一种敏感性很高的实验技术。 由于抗原、抗体的反应在一种固相载体-聚苯乙烯微量滴定板的孔中进行,每加入一种试剂孵育后,可通过洗涤除去多余的游离反应物,从而保证试验结果的特异性与稳定性。
实际应用中,通过不同的设计,具体的方法步骤可有多种。即:用于检测抗体的间接法、用于检测抗原的双抗体夹心法以及用于检测小分子抗原或半抗原的抗原竞争法等等。目前我们对客户提供比较常用的ELISA双抗体夹心法及ELISA间接法服务。
三、“兔子巨噬细胞炎性蛋白1α(MIP-1α/CCL3)ELISA试剂盒”技术流程
双抗体夹心法(检测未知抗原) 间接法(检测未知抗体)
1、用缓冲液将抗体稀释至1-10ug/ml。在反应孔中加0.1ml,4℃ guoye。次日,弃去孔内溶液,用洗涤缓冲液洗3次。
2、加样:加一定稀释的待检样品0.05ml于上述已包被之反应孔中,置37℃ 孵育1小时。然后洗涤(同时做空白孔,阴性对照孔及阳性对照孔)。
3、加酶标抗体:于各反应孔中,加入新鲜稀释的酶标抗体(经滴定后的稀释度)0.05ml。37℃ 孵育0.5~1小时,洗涤。
4、加底物液显色:于各反应孔中加入临时配制的TMB底物溶液0.1ml,37℃ 10~30分钟。
5、终止反应:于各反应孔中加入2M硫酸0.05ml
6、结果判定:可于白色背景上,直接用肉眼观察结果:反应孔内颜色越深,阳性程度越强,阴性反应为无色或极浅,依据所呈颜色的深浅,以“+”、“-”号表示。也可测OD值:在ELISA检测仪上,于450nm(若以ABTS显色,则410nm)处,以空白对照孔调零后测各孔OD值,若大于规定的阴性对照OD值的2.1倍,即为阳性。 1、用包被缓冲液将已知抗原稀释至1-10ug/ml, 每孔加0.1ml,4℃guoye。次日洗涤3次。
2、加样:加一定稀释的待检样品(未知抗体)0.05ml于上述已包被之反应孔中,置37℃孵育1小时,洗涤。(同时做空白、阴性及阳性孔对照)
3、加酶标抗体:于反应孔中,加入新鲜稀释的酶标第二抗体(抗抗体)0.05ml,37℃孵育30-60分钟,洗涤,zui后一遍用DDW洗涤。
4、加底物液显色:于各反应孔中加入临时配制的TMB底物溶液0.1ml,37℃ 10~30分钟。
5、终止反应:于各反应孔中加入2M硫酸0.05ml
6、结果判定:可于白色背景上,直接用肉眼观察结果:反应孔内颜色越深,阳性程度越强,阴性反应为无色或极浅,依据所呈颜色的深浅,以“+”、“-”号表示。也可测OD值:在ELISA检测仪上,于450nm(若以ABTS显色,则410nm)处,以空白对照孔调零后测各孔OD值,若大于规定的阴性对照OD值的2.1倍,即为阳性。
四、客户须知
1、液体类标本(细胞培养上清、组织匀浆、血清、血浆、尿液、胸水、腹水、脑脊液等);
2、样本保存:请尽早检测,2-8℃保存一天;需更长时间须冷冻(-20℃或-70℃)保存。如需周期收集样本,请将样本及时分装标号后,置-20℃或-70℃保存;
3、请提前告诉我们:您样本的种属、样本数量、待测指标及其他特殊要求。
五、计算
以标准物的浓度为纵坐标(对数坐标),OD值为横坐标(对数坐标),在对数坐标纸上绘出标准曲线。推荐使用专业制作曲线软件进行分析,如curve expert 1.3,根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度,再乘以稀释倍数;或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的回归方程式,将样品的OD值代入方程式,计算出样品浓度,再乘以稀释倍数,即为样品的实际浓度。
检测范围:3.12 ng/ml - 200 ng/ml
zui低检测限:0.78 ng/ml
六、“兔子巨噬细胞炎性蛋白1α(MIP-1α/CCL3)ELISA试剂盒”服务参考
售前服务
产品介绍,技术疑难解答
售中服务
1.守信合同,保证及时供货,随时保持与客户
售后服务
1.对用户所有疑问,快速做出反映,售后服务人员在2~3个工作日内给您一个满意的答复。
2.产品如有质量问题,实行包退、包换服务。