HL10152.3
细菌胞浆内钙离子浓度荧光（Fura-2）检测试剂盒产品说明书
主要用途
细菌胞浆内钙离子浓度荧光（Fura-2）检测试剂是一种旨在通过胞浆钙离子特异性荧光探针Fura-2-AM，与
钙离子结合后，其荧光强度显著增强，在荧光酶标仪下测量不同激发波长下相对荧光峰值的比值，来测定
细菌胞浆总钙离子浓度的而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。其适用于各种
活体细菌胞浆钙离子的浓度检测。产品严格无菌，即到即用，操作简捷，性能稳定，检测敏感。
技术背景
细胞浆钙离子在调节钙离子通道，维持细胞内环境钙离子平衡方面起着重要作用。在细菌中，钙对于细菌
的生长和结构具有重要作用。细胞浆钙的检测包括沉淀法、EDTA鳌合滴定法、火焰光度法（flame
photometry）、原子吸收分光光度法等技术，但容易受到钠、钾、磷酸盐、硫酸盐的干扰，或者受限于仪器
的特殊的要求，以及需要细胞浆分离。Fura-2 AM（acetoxy-methyl ester），一种具有细胞膜通透性，与钙离
子结合产生荧光的染料，通过其不同激发波长340nm/380nm产生的荧光信号比（散发波长505nm）来测
定细菌胞浆内钙离子水平。
产品内容
清理液（Reagent A） 40 毫升
染色液（Reagent B） 30 微升
介导液（Reagent C） 600 微升
饱和液（Reagent D） 2 毫升
阴性液（Reagent E） 2 毫升
产品说明书1 份
保存方式
保存染色液（Reagent B）和介导液（Reagent C）在－20℃冰箱里，避免光照；其余的保存在4℃冰箱里；
有效保证6 月
用户自备
1.5 毫升离心管：用于样品操作的容器
培养箱：用于染色孵育
100 微升1 厘米光径比色皿或黑色96 孔板：用于荧光分析的容器
荧光酶标仪：用于荧光分析
（共聚焦）荧光显微镜：用于荧光染色观察
实验步骤
2
一、样品准备
1． 准备好1 毫升待测的细菌样品（1 X 108 细菌/毫升0
2． 放进微型台式离心机离心5 分钟，速度为3500g
3． 小心抽去上清液
4． 加入1 毫升清理液（Reagent A），混匀细菌颗粒群
5． 放进微型台式离心机离心5 分钟，速度为3500g
6． 小心抽去上清液
7． 重复实验步骤4 至6 一次
8． 加入1 毫升清理液（Reagent A），混匀细菌颗粒群
9． 放进冰槽里备用
二、测定准备
1． 设定好荧光酶标仪：激发波长340nm 和380nm，散发波长505nm
2． 测定开始前，将－20℃冰箱里的试剂盒中的染色液（Reagent B）室温下融化，然后分别移出30 微升
介导液（Reagent C）和1.5 微升染色液（Reagent B）到新的1.5 毫升离心管，标记为染色工作液，并
放在暗室里备用。然后进行下列操作。
二、荧光酶标仪检测
1． 准备3 个1.5 毫升离心管，标记为：细菌样品管、空白对照管（不含细菌）、大对照管（含细菌）
2． 分别移取100 微升上述准备的细菌样品到细菌样品管和大样品管里
3． 放进微型台式离心机离心5 分钟，速度为3500g
3． 小心抽去上清液
4． 加入100 微升清理液（Reagent A）到细菌样品管里，混匀细菌颗粒群
5． 加入100 微升饱和液（Reagent D）到大对照管里，混匀细菌颗粒群
6． 加入100 微升阴性液（Reagent E）到空白对照管里
7． 分别加入10 微升染色工作液到所有管里，混匀
8． 放进37℃细胞培养箱里孵育120 分钟，避免光照
9． 转移到100 微升1 厘米光径比色皿或黑色96 孔板里
10．即刻放进荧光酶标仪测读：获得相对荧光单位（relative fluorescence unit；RFU）包括样品RFU340nm、
样品RFU380nm、空白对照孔RFU340nm、空白对照孔RFU380nm、大对照孔RFU340nm、大对照孔
RFU380nm
11．计算样品细菌胞浆钙离子浓度
{[(样品RFU 340mm/样品RFU380nm）-（空白对照孔RFU340nm/空白对照孔RFU380nm）】÷【（大对
照孔RFU 340nm/大对照孔RFU380nm-样品RFU 340nm/样品RFU 380nm）】X（空白对照RFU380nm/
大对照孔RFU380nm）X315（纳摩尔：解离常数）
三、（共聚焦）或荧光显微镜检测
1． 移取300 微升上述准备的细菌样品到1.5 毫升离心管
2． 加入30 微升染色工作液，混匀
3． 放进37℃细胞培养箱里孵育120 分钟，避免光照
3
4． 放进微型台式离心机离心5 分钟，速度为3500g
4． 小心抽去上清液
5． 小心加入500 微升清理液（Reagent A），混匀细菌颗粒群
5． 放进微型台式离心机离心5 分钟，速度为3500g
6． 小心抽去上清液
7． 小心加入300 微升清理液（Reagent A），混匀细菌颗粒群
8． 移取50 微升到载玻片上
9． 盖上盖玻片
10．即刻在（共聚焦）荧光显微镜下进行观察：激发波长340 至400nm，散发波长505nm（细菌胞浆钙离
子呈现蓝色荧光）
注意事项
1． 本产品为20 次（显微镜）或60 次（96 孔板）操作
2． 操作时，须戴手套
3． 可以使用荧光分光光度仪检测
4． 避免使用EDTA 等处理样品
5． 孵育反应完成后即刻进行荧光测定
6． 如果待测样品浓度过高或过低，可以调整样品浓度
7． 检测敏感度可达纳摩尔级钙浓度范围
8． 本公司提供系列钙生化检测试剂产品
质量标准
1． 本产品经鉴定性能稳定
2． 本产品经鉴定检测敏感