各种动物外周血中性粒细胞分离液试剂盒

规格：200 mL/kit

保存：本产品对光敏感，应该室温避光储存，保质期 2 年。无菌开封后，保存于室温。

试剂盒组成： 

试剂A 200mL

试剂C 100mL

细胞洗涤液 200mL

红细胞裂解液 100mL

操作步骤： 

1. 取新鲜抗凝全血，血液体积小于5mL时，在离心管中先加入4mL试剂A，后将2mL试剂C小心叠

加于试剂A之上，形成梯度界面（血液体积大于等于5mL，试剂A与试剂C比例2：1，试剂总量与稀

释后的样本量相等。但二者的总体积不能超过离心管的三分之

二，否则会影响分离效果），将血液平铺到分离液液面上方，

注意保持两液面界面清晰。（可以使用巴氏德吸管吸取血液，

然后将血液小心的平铺于分离液上，因为两者的密度差异，将

形成明显的分层界面。如果样品较多，加样的时间较长，在离

心之前出现红细胞成团下沉属正常现象。）

2. 室温，水平转子500~1000g，离心20~30min（血液的体积

越大所需的离心力越大，离心时间越长，最佳的分离条件需摸

索，离心转速最大不超过1200g）。

3. 离心后，离心管中将出现两层环状乳白色细胞层，上层细

胞为单个核细胞层，下层细胞为中性粒细胞层，如图所示（个

体差异或者是分离条件不同，粒细胞层可分离不明显）。

4. 用吸管小心吸取试剂C与试剂A之间以及试剂A中的中性

粒细胞到15mL洁净的离心管中，10mL PBS或细胞洗涤液洗涤

细胞。250g，离心10min（如有红细胞混杂则加入适量红细胞

裂解液）。

5. 弃上清，5mL的PBS或细胞清洗液重悬细胞，250g，离心

10min。

6. 重复步骤6

7. 弃上清，细胞重悬备用。

注意事项： 

A. 开封前颠倒混匀，本分离液为无菌产品，为延长分离液保存时间，请在无菌条件下启封，避免

微生物污染。。

B. 分离液使用时应始终保持室温（18℃~25℃），如室内温度较低，可将分离液预热。4℃或者是

分离示意图

血浆层

单个核细胞层

试剂 C

试剂 A

红细胞层

中性粒细胞层

温度较低的条件下离心，可能会导致白膜层中红细胞污染加重。

C. 血液样本最好为新鲜抗凝血（采血2 h以内），为保持淋巴细胞的活性，应避免冷冻和冷藏。

D. 血液样本不需稀释，直接进行分离即可。

E. 稀释血液或洗涤细胞，不可使用含Ca、Mg离子的缓冲液及培养液，其成分会导致血细胞凝集，

大大降低细胞得率及纯度。

F. 部分塑料制品（如聚苯乙烯）因其带有的静电作用，可能会导致细胞挂壁，影响分离效果。

G. 血液样本的粘稠度或者是温度差异，可能会影响分离效果，可以调节离心转数和离心时间，摸

索最佳的分离条件。

H. 如果要进一步对分离的细胞进行培养，那在收集血液和分离过程中，注意无菌操作，避免微生

物污染。

I. 不同动物血液在不同比重分离液中的细胞离散系数及细胞带电不同，用户在制定分离液时应提

供所需分离液的比重、动物种属及被分离细胞的名称。