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过氧化物酶(POD)测试盒说明书

时间:2024-11-21      阅读:140

一、测定原理:上海哈灵生物科技有限公司生产的过氧化物酶(POD)测试盒利用过氧化物酶(POD)催化过氧化氢反应的原理,通过测定420nm处吸光度的变化得出其酶活性

二、试剂的组成和配制:(试剂盒有效期6个月)

  • 试剂一:60mL液体×4瓶,4℃保存。

  • 试剂二:粉剂×3瓶,4℃保存。

    • 试剂二应用液的配制:临用每瓶粉剂加入10mL的双蒸水溶解,4℃避光保存。(颜色变深以后弃用)

  • 试剂三:5mL液体×1瓶,4℃保存。

    • 试剂三应用液的配制:临用前用蒸馏水15~30倍稀释,使得在1cm光径、波长240nm下,蒸馏水调零时,试剂三应用液的吸光值保持在0.4左右,现用现配。若吸光值太高,则加蒸馏水稀释;若吸光值太低,则加入适量试剂三。(一般在25倍左右稀释)

  • 试剂四:50mL液体×2瓶,4℃保存

三、所需仪器及试剂:上海哈灵生物科技有限公司推荐使用可调420nm波长的可见光分光光度计及1cm石英光径比色皿,以及可调240nm波长的紫外光分光光度计,涡旋混合器,离心机,37℃水浴锅,秒表,蒸馏水,生理盐水等仪器和试剂

四、操作步骤:

  1. 前处理:

    • 植物组织匀浆的制备:准确称取植物组织重量,按照重量(g):体积(mL)=1:9的比例加入9倍体积的匀浆介质(推荐使用生理盐水(0.86%或0.9%的NaCl水溶液)或磷酸盐缓冲液︰0.1mol /L pH7~7.4),冰水浴条件下制备成10%的组织匀浆液,3500转/分离心10分钟后,取上清液进行测定。

  2. 操作表:

    • 测定管 对照管

    • 试剂一 (mL) 2.4 2.4

    • 试剂二应用液(mL) 0.3 0.3

    • 试剂三应用液(mL) 0.2

    • 双蒸水(mL) 0.2

    • 样本(mL) 0.1 0.1

    • 37℃水浴准确反应30分钟

    • 试剂四(mL) 1.0 1.0

    • 混匀后,3500转/分离心10分钟,取上清于420nm处,1cm光径,双蒸水调零,测定OD


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