主要用途

组织沉默调节蛋白1 （SIRT1）活性比色法定量检测试剂是一种旨在通过比色探针对硝基苯胺标记人工合成的乙酰化p53多肽底物，经过SIRT1脱乙酰基后，被位点特异性氨基肽酶水解，释放黄色对硝基苯胺，即采用比色法来测定组织裂解萃取样品中酶活性的而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。其适用于各种组织裂解萃取液样品（动物、人体）、核蛋白样品、部分或*纯化酶样品中SIRT1的活性定量检测，以及抑制剂和激活剂的筛选。产品严格无菌，即到即用，操作简捷，性能稳定。

技术背景

人体组蛋白脱乙酰基酶（histone deacetylase；HDAC）家属分成三类共20多个蛋白：种类I（class I）与酵母Rpd3蛋白同源，包括HDAC1、2、3、8，存在于细胞核中；种类II（class II）与酵母Hda1蛋白同源，包括HDAC4、5、6、7、9a、9b、10和HDRP/MITR，存在于细胞核和细胞浆里；上述两大种类的蛋白分子催化结构域含有锌，且曲古菌素A（trichostatin A；TSA）敏感。种类III（class III）为NAD+辅助因子必需，又称为sirtuins，与酵母Sir2（Silent Information Regulator 2）同源，包括SIRT1至7等，为曲古菌素A（trichostatin A；TSA）不敏感型赖氨酸脱乙酰基酶（lysyl-deacetylase）。催化赖氨酸脱乙酰基反应，以及由NAD+和乙酰（acetyl）基团转化产生的烟酰胺（nicotinamide）和O-乙酰ADP核糖（O-acetyl-ADP-ribose）。SIRT1位于细胞核内，与酵母Sir2同源性高。其功能在于调节p53活性和抑制细胞凋亡。基于人工合成的乙酰化p53（379至382氨基酸位点）多肽底物Ac-Arg-His-Lys-Lys（Ac）具有抗氨基肽酶切离的功能，首先使用比色染料对硝基苯胺（p-Nitroaniline；p-NA）来标记乙酰化p53多肽底物，其次进行脱乙酰化，后底物进一步在氨基肽酶的催化酶解，释放出具有强烈吸光值的黄色对硝基苯胺（波长405nm），由此来定量测定沉默调节蛋白1的活性。

用户自备

磷酸盐缓冲溶液（PBS）：用于清洗组织样品
15毫升锥形离心管：用于样品处理的容器
1.5毫升离心管：用于样品操作和保存的容器
（微型）台式离心机：用于组织细胞预处理
培养箱：用于反应物孵育
96孔板或100微升1厘米光径比色皿：用于反应和比色的容器
酶标仪或分光光度仪：用于比色分析

注意事项

1．本产品为20次操作，包括背景对照
2．操作时，须戴手套
3．系统操作过程中，背景测定只需1次
4．样品须澄清，至关重要 
5．样品处理时，避免使用蛋白酶抑制剂、PMSF、烷基胺（alkyl amine）等
6．孵育反应完成后即刻进行比色测定
7．滤波器可以使用波长400nm替代405nm
8．测定值由低到高变化；酶动法测定可以持续60分钟
9．测定值吸光读数越高，表明酶活性越高
10．比色测定后，比色皿须清洗*
11．待测样本为核蛋白样品，其蛋白浓度为50微克/20微升；待测样本为组织裂解悬液，其蛋白浓度为200微克/20微升（本公司提供  Bradford蛋白质浓度定量试剂盒30030.1） 
12．如果待测样品浓度过高或过低，可以调整样品浓度
13．沉默调节蛋白1单位活性定义为：在30℃，pH 8.0条件下，每分钟内能够释放1微摩尔对硝基苯酚所需的酶量作为一个活性单位
14．本公司提供系列组蛋白脱乙酰基酶检测试剂产品

质量标准

1．本产品经鉴定性能稳定
2．本产品经鉴定检测敏感