冰冻切片弹性纤维（ELASTIC）马森（MASSON）染色试剂盒产品说明书 主要用途 冰冻切片弹性纤维（ELASTIC）马森（MASSON）染色试剂是一种旨在使用标准化的化学脱蜡方法和伟郝夫（Verhoeff）苏木素以及三色染料（trichrome），分析和区分冰冻组织切片中的弹性纤维的而经典的技术方法。该技术经过精心改良传统方法、成功实验证明的。广泛用于结缔组织、肌肉组织和纤维蛋白的研究等。产品严格无菌，即到即用，操作简捷，性能稳定，显色清晰。 技术背景 弹性纤维（elastic fiber），又称为黄色纤维（yellow fiber），是固有结缔组织（Connective tissue proper）细胞外基质的成分之一，由平滑肌细胞和成纤维细胞产生弹力蛋白质（elastin）、原纤维蛋白（fibrillin；FBN）等构成。弹性纤维具有可伸展性。存在于皮肤、肺、动脉、静脉、弹力软骨、牙周韧带（periodontal ligament）、脂肪组织中。弹性纤维缺失导致皮肤松弛症（cutis laxa）、威廉姆斯综合征（Williams Syndrome）等疾病。基于摩罗利 （mallory）应用三色系统的方法，马森（masson）进行了改良，在三色复合染料体系中，使用苯胺篮（aniline blue）替代绿篮。同时使用伟郝夫（Verhoeff）苏木素选择性染色弹性纤维，三色复合染料帮助区别其它包括肌肉、胶原纤维、纤维蛋白（fibrin）等组织成分。马森方法操作复杂，可以细致区分多种组织成分。 产品内容 清理液（Reagent A） 200毫升 固着液（Reagent B） 10毫升 韦格液（Reagent C） 100毫升 祛色液（Reagent D） 20毫升 岑克液（Reagent E） 100毫升 范氏液（Reagent F） 10毫升 比氏液（Reagent G） 10毫升 酸性液（Reagent H） 10毫升 染色液（Reagent I） 10毫升 修正液（Reagent J） 10毫升 脱水液A（Reagent K） 10毫升 脱水液B（Reagent L） 10毫升 透明液（Reagent M） 10毫升 产品说明书 1份 保存方式 保存在4℃冰箱里，避免光照；试剂具有腐蚀性，注意安全；有效保证6月 用户自备 小型玻璃染色缸：用于组织或切片处理的容器 培养箱或烘箱：用于样品反应孵育 微波炉：用于样品反应孵育处理 中性树脂：用于切片封片 光学显微镜：用于切片染色后观察分析 实验步骤 一、样品固着处理 1．准备好5微米厚的冰冻切片 2．小心加上200微升清理液（Reagent A）在切片上，铺满整个切片样品表面 3．室温下孵育2分钟 4．小心移去切片上的清理液（Reagent A） 5．小心加上200微升固着液（Reagent B）在切片上，铺满整个切片样品表面 6．室温下孵育5分钟 7．小心移去切片上的固着液（Reagent B） 8．小心加上200微升清理液（Reagent A）在切片上，铺满整个切片样品表面 9．室温下孵育2分钟 10．小心移去切片上的清理液（Reagent A） 二、样本染色处理 操作一：标准染色 1．小心加入1毫升韦格液（Reagent C）在切片上，铺满整个切片样品表面 2．放进60℃恒温培养箱孵育60分钟 3．小心移去韦格液（Reagent C） 4．室温下，小心将切片置入50毫升清理液（Reagent A）中孵育2分钟 5．小心移去切片上的清理液（Reagent A） 6．小心加入200微升祛色液（Reagent D）在切片上，铺满整个切片样品表面 7．室温下孵育5分钟 8．小心移去祛色液（Reagent D） 9．室温下，小心将切片置入50毫升清理液（Reagent A）中孵育2分钟 10．小心移去切片上的清理液（Reagent A） 11．小心加入1毫升岑克液（Reagent E）在切片上，铺满整个切片样品表面 12．放进60℃恒温培养箱孵育60分钟 13．小心移去岑克液（Reagent E） 14．室温下，小心将切片置入50毫升清理液（Reagent A）中孵育2分钟 15．小心移去切片上的清理液（Reagent A） 16．小心加入200微升范氏液（Reagent F）在切片上，铺满整个切片样品表面 17．室温下孵育30分钟 18．小心移去范氏液（Reagent F） 19．室温下，小心将切片置入50毫升清理液（Reagent A）中孵育2分钟 20．小心移去切片上的清理液（Reagent A） 21．小心加入200微升祛色液（Reagent D）在切片上，铺满整个切片样品表面 22．室温下孵育5分钟 23．小心移去祛色液（Reagent D） 24．室温下，小心将切片置入50毫升清理液（Reagent A）中孵育2分钟 25．小心移去切片上的清理液（Reagent A） 26．小心加入200微升比氏液（Reagent G）在切片上，铺满整个切片样品表面 27．室温下孵育5分钟（注意：可以延长至15分钟，增强染色效果） 28．小心移去比氏液（Reagent G） 29．小心加入200微升清理液（Reagent A）在切片上，铺满整个切片样品表面 30．小心移去切片上的清理液（Reagent A） 31．重复实验步骤29至30二次 32．小心加入200微升酸性液（Reagent H）在切片上，铺满整个切片样品表面（注意：可以孵育15分钟，增强染色效果） 33．小心移去切片上的酸性液（Reagent H） 34．小心加上200微升 染色液（Reagent I）在切片上，铺满整个切片样品表面 35．室温下孵育5分钟，避免光照（注意：可以延长至15分钟，增强染色效果） 36．小心移去切片上的染色液（Reagent I） 37．小心加上200微升 修正液（Reagent J）在切片上，铺满整个切片样品表面 38．室温下孵育2分钟 39．小心移去切片上的修正液（Reagent J） 40．室温下，小心将切片置入50毫升清理液（Reagent A）中孵育2分钟 41．小心移去切片上的清理液（Reagent A） 42．（选择步骤）小心加上200微升脱水液A（Reagent K）在切片上，铺满整个切片样品表面（注意：如果比氏液（Reagent G）染色过深，建议使用由此步骤开始的选择步骤，并快速操作） 43．（选择步骤）小心移去切片上的脱水液A（Reagent K） 44．（选择步骤）小心加上200微升脱水液B（Reagent L）在切片上，铺满整个切片样品表面 45．（选择步骤）小心移去切片上的脱水液B（Reagent L） 46．（选择步骤）小心加上200微升透明液（Reagent M）在切片上，铺满整个切片样品表面 47．（选择步骤）小心移去切片上的透明液（Reagent M） 48．放上盖玻片或封片（中性树脂） 49．即刻在一般光学显微镜下观察： 弹性纤维――呈现黑色 细胞核――呈现黑色 细胞质――呈现红色 肌纤维――呈现红色 角蛋白――呈现红色 胶原纤维――呈现蓝色 操作二：热处理染色 1．准备3个50毫升烧杯或小型染色缸，分别加入50毫升清理液（Reagent A）、韦格液（Reagent C）和岑克液（Reagent E） 2．小心放进上述固着处理的切片到50毫升韦格液（Reagent C）小型染色缸里 3．放进微波炉（600瓦）加热45秒 4．小心移去切片上的韦格液（Reagent C） 5．室温下，小心将切片置入50毫升清理液（Reagent A）中孵育2分钟 6．小心移去切片上的清理液（Reagent A） 7．小心加入200微升祛色液（Reagent D）在切片上，铺满整个切片样品表面 8．室温下孵育5分钟 9．小心移去祛色液（Reagent D） 10．室温下，小心将切片置入50毫升清理液（Reagent A）中孵育2分钟 11．小心移去切片上的清理液（Reagent A） 12．小心将切片置入50毫升岑克液（Reagent E）小型染色缸里 13．放进微波炉（600瓦）加热60秒 14．小心移去岑克液（Reagent E） 15．室温下，小心将切片置入50毫升清理液（Reagent A）中孵育2分钟 16．小心移去切片上的清理液（Reagent A） 17．小心加入200微升范氏液（Reagent F）在切片上，铺满整个切片样品表面 18．室温下孵育30分钟 19．小心移去范氏液（Reagent F） 20．室温下，小心将切片置入50毫升清理液（Reagent A）中孵育2分钟 21．小心移去切片上的清理液（Reagent A） 22．小心加入200微升祛色液（Reagent D）在切片上，铺满整个切片样品表面 23．室温下孵育5分钟 24．小心移去祛色液（Reagent D） 25．室温下，小心将切片置入50毫升清理液（Reagent A）中孵育2分钟 26．小心移去切片上的清理液（Reagent A） 27．小心加入200微升比氏液（Reagent G）在切片上，铺满整个切片样品表面 28．室温下孵育5分钟（注意：可以延长至15分钟，增强染色效果） 29．小心移去比氏液（Reagent G） 30．小心加入200微升清理液（Reagent A）在切片上，铺满整个切片样品表面 31．小心移去切片上的清理液（Reagent A） 32．重复实验步骤30至31二次 33．小心加入200微升酸性液（Reagent H）在切片上，铺满整个切片样品表面 34．室温下孵育10分钟（注意：可以延长至15分钟，增强染色效果） 35．小心移去切片上的酸性液（Reagent H） 36．小心加上200微升 染色液（Reagent I）在切片上，铺满整个切片样品表面 37．室温下孵育5分钟，避免光照（注意：可以延长至15分钟，增强染色效果） 38．小心移去切片上的染色液（Reagent I） 39．小心加上200微升 修正液（Reagent J）在切片上，铺满整个切片样品表面 40．室温下孵育1分钟 41．小心移去切片上的修正液（Reagent J） 42．室温下，小心将切片置入50毫升清理液（Reagent A）中孵育2分钟 43．小心移去切片上的清理液（Reagent A） 44．（选择步骤）小心加上200微升脱水液A（Reagent K）在切片上，铺满整个切片样品表面（注意：如果比氏液（Reagent G）染色过深，建议使用由此步骤开始的选择步骤，并快速操作） 45．（选择步骤）小心移去切片上的脱水液A（Reagent K） 46．（选择步骤）小心加上200微升脱水液B（Reagent L）在切片上，铺满整个切片样品表面 47．（选择步骤）小心移去切片上的脱水液B（Reagent L） 48．（选择步骤）小心加上200微升透明液（Reagent M）在切片上，铺满整个切片样品表面 49．（选择步骤）小心移去切片上的透明液（Reagent M） 50．放上盖玻片或封片（中性树脂） 51．即刻在一般光学显微镜下观察： 弹性纤维――呈现黑色 细胞核――呈现黑色 细胞质――呈现红色 肌纤维――呈现红色 角蛋白――呈现红色 胶原纤维――呈现蓝色 注意事项 1．本产品为50次操作 2．操作时，须戴手套 3．试剂具有腐蚀性，注意操作安全 4．建议使用玻璃染色缸 5．每次更换试剂溶液时，保持切片面基本晾干 6．试剂溶液在切片表面时，避免有气泡存在，同时确保铺满切片表面 7．整个操作，在避光状态下进行 8．染色完成后，即刻进行光学显微镜观察 9．样品染色后保存，避免光照 10．本公司提供系列特定组织染色试剂产品 质量标准 1．本产品经鉴定性能稳定 2．本产品经鉴定显色清晰