PicoGreen双链DNA荧光定量测定试剂盒产品说明书 主要用途 PicoGreen双链DNA荧光定量测定试剂是一种旨在通过使用PicoGreen荧光染料与样品中双链DNA的高度特异性结合而产生荧光信号来定量样品中DNA含量的而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。其适用于各种原核生物和真核生物的细胞或组织DNA以及环境中DNA含量分析。产品严格无菌，即到即用，性能稳定，高度敏感。 技术背景 作为DNA染色剂之一的PicoGreen荧光染料特异性地与样品中双链DNA结合，产生荧光信号。PicoGreen技术可以检测到低达0.5纳克双链DNA的变化。DNA的微量增加引起荧光信号强度（Intensity）或相对荧光单位（RFU）的显著增加。其自发荧光（Autofluorescence）忽略不计，重复性标准差异（Standard Deviation）低，不受样品化学成分的干扰。 产品内容 染色液（Reagent A） 62.5微升 稀释液（Reagent B） 15 毫升 标准液（Reagent C） 1毫升 产品说明书 1份 保存方式 保存染色液（Reagent A）和标准液（Reagent C）在－20℃冰箱里，其余的保存在4℃冰箱里，染色液（Reagent A）避免光照，有效保证6月 用户自备 1.5毫升离心管：用于工作液配制的容器 比色皿或96孔板：用于荧光分析的容器 荧光分光光度仪或荧光酶标仪：用于荧光定量分析 实验步骤 一、测定准备 1．准备好待测样品，置于冰槽里 2．设定好荧光分光光度仪（温度为37℃）：激发波长480nm，散发波长530nm，并置零 3．实验开始前，将－20℃冰箱里的试剂盒中的染色液（Reagent A）置于冰槽里融化。然后移出5毫升稀释液（Reagent B）到新的15毫升离心管，加入25微升染色液（Reagent A），混匀后，用锡纸包裹，标记为染色工作液，放在暗室里。然后进行下列操作。 二、构建标准曲线 1．准备好5个1.5毫升离心管，标记为1至5号管 2．分别加入500微升稀释液（Reagent B）到每个离心管 3．移取500微升标准液（Reagent C）到1号管，混匀 4．小心移取500微升1号管稀释的标准液（Reagent C）到2号管，混匀 5．小心移取500微升2号管稀释的标准液（Reagent C）到3号管，混匀 6．小心移取500微升3号管稀释的标准液（Reagent C）到4号管，混匀 7．将1至5号管放进冰槽里备用；标准管含量见下表 管号 缓冲液（Reagent B） 标准液（Reagent C） 标准DNA总量 1 500微升 500微升 1微克 2 500微升 500微升1号管 0.5微克 3 500微升 500微升2号管 0.25微克 4 500微升 500微升3号管 0.125微克 5 500微升 空对照 0 8．移取500微升含有染色液（Reagent A）和稀释液（Reagent B）的染色工作液到新的比色皿 9．加入500微升上述配制的标准液 10．室温下，孵育5分钟，避免光照 11．即刻放进荧光分光光度仪测读：获得相对荧光单位（Relative Fluorescence Unit；RFU） 12．重复实验步骤8至11四次 13．绘制标准曲线：纵座标（Y轴）为相对荧光单位（RLU）；横坐标（X轴）为DNA含量（微克） 三、样品检测 1．移取500微升含有染色液（Reagent A）和稀释液（Reagent B）的染色工作液到新的比色皿 2．加入500微升待测样品 3．室温下，孵育5分钟，避免光照 4．即刻放进荧光分光光度仪测读：获得相对荧光单位（Relative Fluorescence Unit；RFU） 5．根据标准曲线获得样品对应DNA含量（微克） 6．样品实际DNA浓度： [根据标准曲线获得样品对应DNA含量（微克）X样品稀释倍数]0.5（样品容量；毫升）=微克/毫升 注意事项 1．本产品为20次（比色皿）和100次（96孔板）操作，包括标准曲线测定 2．操作时，须戴手套 3．使用新鲜配制的染色工作液，务必不要超过2小时，且注意避光 4．建议使用塑料管配制染色工作液，而不是玻璃制品 5．孵育时，避免光照 6．系统检测，标准曲线测定1次即可；如果仪器更换，则需要重新测定1次 7．如果荧光读数过高，可以相应稀释样品量 8．可以使用荧光酶标仪检测，试剂用量和体系均除以5，包括标准DNA含量，其计算公式： [根据标准曲线获得样品对应DNA浓度（微克）X样品稀释倍数]÷0.1（样品容量；毫升）＝微克/毫升 9．盐类、尿素、乙醇、lv仿、去垢剂、蛋白、琼脂糖、单链DNA和RNA不会干扰检测 10．本公司提供系列DNA检测试剂产品 质量标准 1．本产品经鉴定性能稳定 本产品经鉴定高度敏感