新品│Endonuclease VIII：精准切割DNA受损碱基，助力基因损伤修复研究
时间：2023-08-25 阅读：127
新品│Endonuclease VIII：精准切割DNA受损碱基，助力基因损伤修复研究
核酸内切酶 Ⅷ(Endonuclease VIII, Endo Ⅷ)是一种具有N-糖基化酶活性(N-glycosylase)和AP-裂解酶(AP-lyase)活性的DNA损伤修复酶，参与氧化产生的DNA损伤的碱基切除修复。
Endonuclease VIII识别双链DNA上受损碱基并在其N-糖基化酶活性作用下切除双链DNA上受损的嘧啶碱基，产生一个脱嘌呤(AP)位点。随后，在其AP裂解酶活性作用下切割AP位点的3'和5'端，产生一个具有3'和5'磷酸的碱基缺口。
图1. Endonuclease VIII反应原理示意图
翌圣的Endonuclease Ⅷ（Cat#14536ES）由分子酶改造平台——ZymeEditor™重组表达而来，高纯度，无核酸外切酶、核酸内切酶以及RNase残留。可应用于单细胞凝胶电泳、NGS建库中DNA损伤修复、酶法合成DNA中释放DNA链、碱洗脱，搭配UDG(Cat#10303ES)进行含U片段的克隆等。
分别使用翌圣与进口品牌N*的Endonuclease Ⅷ催化20 pmol寡聚核苷酸，20 µL反应体系中加入5~40 U的Endonuclease Ⅷ 和相同酶活的UDG(Cat#10303ES)，37℃孵育1 h。琼脂糖凝胶电泳检测结果表明，翌圣Endonuclease Ⅷ与进口品牌N*的碱基切除效果一致。
图2. 受损碱基切除效果对比
将10 U Endonuclease VIII分别与相应的底物DNA/RNA在37℃孵育4 h，琼脂糖凝胶电泳检测结果表明，Endonuclease VIII 无核酸外切酶、核酸内切酶、RNase残留。
图3. 核酸外切酶、核酸内切酶、RNase残留检测结果
