新品 | 翌圣GMP级别RNA合成酶原料：BsaI
时间：2023-08-25 阅读：218
mRNA合成的关键步骤之一是将质粒DNA进行线性化，这一步需要使用限制性内切酶，IIs型内切酶是质粒线性化的内切酶，因为它们在识别位点下游切割DNA，可确保所设计的poly(A)尾的完整性，线性化后的DNA模板上不会留下“疤痕”，IVT过程中也不会添加不需要的核苷酸。BsaI是常见的IIs型内切酶之一，在mRNA合作中起着重要作用。
图1. BsaI识别位点及切割序列
翌圣的BsaI由大肠杆菌重组表达，GMP标准生产，酶切效率高、星号活性低、末端完整性良好，可用于mRNA疫苗生产的质粒线性化、慢病毒/腺病毒包装的载体构建、质粒制备的酶切验证、Golden Gate组装等。
产品特点
严格按照GMP标准生产，确保无动物源成分引入。核酸酶，蛋白酶、宿主DNA/蛋白残留、支原体、内毒素等均严格质控确保产品质量。
具有高酶切效率，37℃反应16 h无星号活性，经酶切—连接—再酶切测试末端完整性良好。
将20 U BsaI与底物DNA在37℃孵育 1 h和16 h，琼脂糖凝胶电泳比较DNA谱带变化。结果显示翌圣BsaI无非特异性核酸酶残留。
图2. 非特异性核酸酶残留检测结果
通过“酶切—连接—再酶切”的功能实验验证BsaI酶切的末端完整性，结果显示翌圣的BsaI末端完整性良好，与进口品牌效果一致。
图3. BsaI末端完整性检测结果
在37℃下，将BsaI及底物DNA在酶切反应体系中共同孵育16h，未检测到星号活性引起的底物非特异性降解，表明翌圣BsaI 16 h孵育无星号活性。
图4. BsaI星号活性检测结果
