稀释前将Ceturegel®基质胶和适量体积的DMEM/F12放入4度冰箱过夜融化。

将冻存管内细胞悬液转移至含3~4ml的H9全培养液的15ml离心管内，以1000rpm，离心5min。

离心后将上清液吸除，轻弹离心管底，使细胞沉淀松散，加入新鲜的H9全培养液2~3ml，轻轻吹打一次使细胞克隆块悬浮。

转移至已经铺好Ceturegel®基质胶的6孔板中培养。

复苏第二天不换液，第三天起每天更换H9细胞全培养液。

注意：复苏时不能吹打过度，不能吹打成单细胞，保持细胞克隆块状，复苏后48小时换液，期间最好不要挪动细胞。H9复苏后可能4~5天才开始有克隆出现，7-10天传代（具体视克隆密度和大小而定）。

一般在复苏后第7~10天传代，之后常规传代为6-7天一次。

在显微镜下观察，直至克隆脱落（一般需要3~6min）。

将带有脱落克隆的消化液转移至15ml离心管中，放置一会，待克隆自然沉降后将上层吸除，加入H9全培养液3ml轻轻混匀，放置一会，待克隆自然沉降后将上层培养液吸除，重复一次（即H9全培养液漂洗2遍，沉降后吸掉上清）。

加入H9全培养液3ml，用1ml移液器吹打2-3次，将克隆块吹散成大小为原来的约1/10（若想得到大小较均一的克隆块，此时可将细胞静置片刻，待细胞自然沉降后取悬浮于液体中间层的克隆块传代），传代比例根据母瓶克隆密度和大小而定，一般1:3~1:5传代。

放入37℃培养箱内培养。

第二天不换液，第三天起每天换液，换液前显微镜下将分化的克隆挑除。

注意：传代时不能吹打过度，不能吹打成单细胞，保持细胞克隆块状，传代后48小时换液，期间最好不要挪动细胞。每6~7天传代一次。