3’-5’方向的dsDNA外切酶，从dsDNA链的3’端逐个去除单核苷酸-技术文章-翌圣生物科技（上海）股份有限公司手机版

3’-5’方向的dsDNA外切酶，从dsDNA链的3’端逐个去除单核苷酸

时间：2024-11-22 阅读：11

重组酶聚合酶扩增（Recombinase Polymerase Amplification，RPA）是一种新型核酸恒温扩增技术，可以在37~42 ℃条件下，10~30 min内实现待测靶标的快速检测。它具有反应灵敏度高、特异性强、对仪器依赖程度低且可整合多种检测模式等优点，特别适用于基层和现场即时检测，可广泛应用于体外诊断、动物疫病、食品安全、生物安全、农业等领域。

图1.RPA等温扩增技术原理图[1]

目前常用的与RPA扩增相结合的检测方法有电泳法、荧光探针法、侧流层析试纸条（LF-RPA）、絮凝分析检测法，其中荧光探针法因操作简便、灵敏度高、特异性强、无需开盖处理产物（减少气溶胶污染）等优势，已发展为目前常用的一种结合RPA扩增的检测手段。荧光探针法RPA主要在RPA扩增的基础上，加入了Exonuclease III和exo荧光探针，在RPA扩增过程中Exonuclease III会特异地切割荧光探针（THF位点），导致荧光基团与淬灭基团分开，荧光信号被检测到，通过荧光收集的仪器来实时监控荧光值的变化。翌圣特推出一款Exonuclease III（Cat#14525ES），为RPA扩增技术的广泛应用助力。

图2.EXO探针法检测原理图[2]

翌圣Exonuclease III

翌圣Exonuclease III是一种无碱基序列依赖性的核酸外切酶，该酶作用于双链DNA，从3’OH末端方向逐步切去单核苷酸。该酶能降解平滑末端、3’凹陷末端及有切口的DNA，但是不能降解3’-突出末端大于或等于四碱基的序列。此外，该酶也有RNase H、3’-磷酸酶、脱嘌呤/嘧啶（AP）位点特异性核酸内切酶活性。

产品应用

RPA扩增中荧光探针的降解，释放荧光信号；
分子信号放大技术中双链DNA 3’平末端切割；
单链特异性探针的制备；
制备用于双脱氧测序的单链底物；
双链DNA的非定向巢式缺失。

性能展示

无核酸内切酶残留

图3.对翌圣Exonuclease III（Cat#14525ES）进行核酸内切酶残留检测，结果显示测试组与对照组条带无明显差异，说明翌圣Exonuclease III（Cat#14525ES）无核酸内切酶残留。

应用于RT-RPA反应，对RNA病毒的检测限低至10 copies/T

图4.用翌圣Exonuclease III（Cat#14525ES）进行RT-RPA反应，扩增RNA病毒，检测限低至10 copies/T。

应用于单克隆实验，提高单克隆阳性率

图5.使用翌圣Exonuclease III（Cat#14525ES）在单克隆实验前处理PCR回收产物，用于酶切去除产物中的短片段，提高单克隆阳性率。结果显示翌圣Exonuclease III（Cat#14525ES）可显著提高单克隆阳性率，且效果优于进口品牌A*的Exonuclease III产品。

翌圣RPA相关产品推荐

产品名称	产品货号	产品作用
Exonuclease III(100 U/μL)	14525ES	具有3’→5’外切酶活性，切断荧光探针中淬灭基团，释放荧光
Bsu DNA polymerase(Large fragment,5U/μL)	11078ES	结合引物与原始靶核酸序列互补合成新的DNA模板
T4UvsXRecombinase(2μg/μL)	11079ES	具有配对和链转移活性的重组酶
T4UvsY protein(2μg/μL)	11080ES	重组酶辅助因子，刺激T4UvsX的单链DNA依赖性ATP酶活性并降低活性所需的T4UvsX临界浓度
T4 gene 32 protein(gp 32)T4噬菌体基因32编码蛋白	11081ES	参与DNA复制、修复、重组与解链后的单链DNA结合，防止自杂交
Creatine Kinase(2μg/μL)肌酸激酶	14502ES	刺激ATP和肌酸分解为磷酸肌酸

参考文献：

[1] 施奕,徐昌平,余蓓蓓,卢亦愚,梅玲玲.重组酶聚合酶扩增技术研究进展[J].病毒学报, 2020,36(03):522-532.

[2] JiaLi, JoanneMacdonald, Stetten F. Review: a comprehensive summary of a decade development of the recombinase polymerase amplification[J]. The Analyst, 144.