产品介绍

DAPI，也称DAPI dihydrochloride，是一种常用的核酸染料，和EB(ethidium bromide)相比，DAPI对双链DNA的染色灵敏度要高很多倍。尽管DAPI不能通过活细胞膜，但可以通过提高浓度使之进入活细胞。DAPI具有很高的光漂白承受水平，能用来检测酵母线粒体DNA，叶绿体DNA，病毒DNA，Microplasm DNA以及染色体DNA。

技术原理

DAPI可以和双链DNA富含AT序列的小沟结合，产生比自身强20多倍的蓝色荧光。DAPI也可对RNA进行染色，染色机理是其可以选择性嵌入“AU序列”并发出荧光。相比DAPI-dsDNA（Ex/Em=358 nm/461 nm），DAPI-RNA具有较长的最大发射波长（500 nm），其荧光亮度仅有DAPI-dsDNA的20%。

运输与保存方法

冰袋运输，5 mg/mL的DAPI储存液于-20ºC避光保存，1年有效。

使用方法

1、用双蒸水或PBS稀释母液，配制成所需要的工作的浓度（0.5-10 μg/mL）。

2、对于固定的细胞或组织样品，固定后，适当洗涤去除固定剂。DAPI染色通常在其他染色的最后进行。如果不需要进行其它染色，则直接进行DAPI 染色。

3、细胞培养物中加入适量DAPI染色液，约1/10细胞培养基体积，必须充分覆盖住待染色的样品。通常对于六孔板一个孔需加入1 mL染色液，对于96孔板一个孔需加入100 μL染色液。 

4、在37℃培养细胞 10～20 分钟。

5、用 PBS或合适的缓冲液洗细胞两次。

6、直接在荧光显微镜下观察或封片后荧光显微镜下观察。激发波长360 nm，发射波长460 nm。

不同DAPI染色的结果

注意事项

1）DAPI对人体有一定刺激性，请注意适当防护。

2）荧光染料都存在淬灭的问题，建议染色后尽量当天完成检测。

3）为减缓荧光淬灭可以使用抗荧光淬灭封片液。

4）低浓度的DAPI不容易穿透细胞膜。

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