Hieff NGSTM cfDNA Clean Beads (100-200 bp)

12599ES03Hieff NGSTM cfDNA Clean Beads (100-200 bp)

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2022-02-10 10:20:21
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翌圣生物科技(上海)股份有限公司

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产品简介

cfDNA提取过程中,常会引入大片段DNA或gDNA的污染。常规情况下,这些污染物可以通过对目的片段进行磁珠分选回收而去除。但是,由于cfDNA仅有170 bp左右,常用的AMPure XP或SPRI Select磁珠对100-200 bp的回收效率较低,无法获得理想的cfDNA回收效果。

详细介绍

Hieff NGSTM cfDNA Clean Beads (100-200 bp)

产品信息

产品名称

产品编号

规格

储存

价格(元)

Hieff NGSTM cfDNA Clean Beads (100-200 bp)

12599ES03

1 mL

4℃

466.00

Hieff NGSTM cfDNA Clean Beads (100-200 bp)

12599ES08

5 mL

4℃

1666.00

Hieff NGSTM cfDNA Clean Beads (100-200 bp)

12599ES56

60 mL

4℃

9106.00

产品描述

cfDNA提取过程中,常会引入大片段DNA或gDNA的污染。常规情况下,这些污染物可以通过对目的片段进行磁珠分选回收而去除。但是,由于cfDNA仅有170 bp左右,常用的AMPure XP或SPRI Select磁珠对100-200 bp的回收效率较低无法获得理想的cfDNA回收效果

Hieff NGSTM cfDNA Clean Beads (100-200 bp)是针对上述问题的解决而专门设计的磁珠类产品,其基于SPRI (Solid Phase Reverse Immobilization)原理制备,配合精心优化的缓冲体系和已经验证的操作体系,可精确回收100-200 bp cfDNA,有效去除大片段DNA和gDNA的污染,同时具有操作简单、回收率高(>95%等优势使用本品获得的cfDNA产物,可直接应用二代测序文库构建、克隆、酶切、连接等反应。本产品中提供的所有试剂组分均经过严格质检,zui高程度保障产品优异性能与批间稳定性。

运输与保存方法

冰袋运输。2-8℃保存,效期一年避免冷冻

注意事项

1)为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

2)磁珠使用前须在室温平衡至少30 min。

3)80%乙醇需现用现配,否则将影响回收效率。

4)进行长度分选时,初始样品体积≥50 μL,不足时请用超纯水补齐。样品体积太小将导致移液误差增大,进而影响分选的准确性

使用方法

1. 准备工作

将磁珠由冰箱中取出,室温平衡至少30 min。配制80%乙醇。

2. 长度分选(双轮法)

长度分选操作流程如图1所示,具体操作如下。

 
 

 

1 双轮分选操作流程。

 

表1磁珠cfDNA-片段回收推荐比例

cfDNA-片段长度

100-200 bp

*轮体积比(Beads:DNA)

0.47×

第二轮体积比(Beads:DNA)

0.33×

:“×表示样品DNA体积。若样品DNA体积为100 mL,则*轮磁珠使用体积为0.47×100 mL=47 mL;第二轮磁珠使用体积为0.33×100 mL=33 mL。

1)请涡旋振荡或充分颠倒磁珠以保证混匀。

2)根据要求,参考1向DNA溶液中加入第一轮分选磁珠,涡旋混匀或移液器吹打10次混匀

3)室温孵育5 min。

4)将离心管短暂离心并置于磁力架中,待溶液澄清后约5 min),小心转移上清到干净的离心管中注意:转移上清时,请勿吸取磁珠,即使微量残留都将影响后续文库质量。】

5)参考1向上清中加入第二轮分选磁珠

6)涡旋混匀或移液器吹打10次混匀,室温静置5 min

7)将离心管短暂离心并置于磁力架中待溶液澄清后约5 min),小心移除上清

8)保持EP管始终处于磁力架中,加入200 μL新鲜配制的80%乙醇漂洗磁珠室温孵育30 sec,小心移除上清

9)重复步骤8

10)保持离心管始终处于磁力架中,开盖干燥磁珠至刚刚出现龟裂(约5 min)注意切记磁珠不要干燥时间太久,磁珠干燥过度将影响纯化效果。】

11)将离心管从磁力架中取出,加入适量ddH2O(≥20 μL)涡旋振荡或使用移液器轻轻吹打充分混匀,室温静置5 min。

12将离心管短暂离心并置于磁力架中分离磁珠和液体。待溶液澄清后约5 min),小心吸取上清至干净的管中即完成分选

3. 文库大小分选参考条件

使用Hieff NGSTM cfDNA Clean Beads以0.47×/0.33×的双轮分选比例,回收100-200 bp DNA-片段。结果显示:Hieff NGSTM cfDNA Clean Beads的回收率高达95%以上(表2),且几乎*去除了大片段污染(图2)

 

图2. 模拟cfDNA纯化结果。

阴性对照为20 bp ladder和100 bp ladder等比例混合物(红色),使用cfDNA Clean Beads对混合物进行0.47×/0.33×分选(绿色和蓝色,平行重复)。

表2. 双轮回收后100-200 bp各片段的回收率统计

DNA-片段位置

片段信号值(FU)

回收率

对照

0.47×/0.33×回收

P1

3.9

3.7

3.9

3.8

97.44%

P2

3.1

3.2

2.9

3.05

98.39%

P3

3.1

2.9

3.0

2.95

95.16%

P4

3.1

3.0

3.0

3.0

96.77%

HB170811

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