Yeasen/翌圣生物 品牌
生产厂家厂商性质
上海市所在地
Hieff NGS® Ultima Pro PCR Free DNA Library Pr
¥2475phi29 DNA Polymerase (10 U/μL)
¥585Recombinant Ten-Eleven Translocase
¥1555Recombinant Ten-Eleven Translocase (TET)14
¥1555Recombinant APOBEC3A (A3A) Protein
¥13354×Multiplex PCR Master Mix for Pathogen
¥725Hieff NGS® G-Type In-Situ DNA Binding Profili
¥2855Hieff Canace® Uracil+ High-Fidelity DNA polym
¥3015E. coli DNA ligase (60 U/μL)
¥554× Frag/Prime Buffer
¥102Hieff NGS® dsDNA Methyl Library Prep Kit for
¥3155文库构建专用接头试剂盒
¥515Hieff NGSTM cfDNA Clean Beads (100-200 bp)
产品信息
产品名称 | 产品编号 | 规格 | 储存 | 价格(元) |
Hieff NGSTM cfDNA Clean Beads (100-200 bp) | 12599ES03 | 1 mL | 4℃ | 466.00 |
Hieff NGSTM cfDNA Clean Beads (100-200 bp) | 12599ES08 | 5 mL | 4℃ | 1666.00 |
Hieff NGSTM cfDNA Clean Beads (100-200 bp) | 12599ES56 | 60 mL | 4℃ | 9106.00 |
产品描述
cfDNA提取过程中,常会引入大片段DNA或gDNA的污染。常规情况下,这些污染物可以通过对目的片段进行磁珠分选回收而去除。但是,由于cfDNA仅有170 bp左右,常用的AMPure XP或SPRI Select磁珠对100-200 bp的回收效率较低,无法获得理想的cfDNA回收效果。
Hieff NGSTM cfDNA Clean Beads (100-200 bp)是针对上述问题的解决而专门设计的磁珠类产品,其基于SPRI (Solid Phase Reverse Immobilization)原理制备,配合精心优化的缓冲体系和已经验证的操作体系,可精确回收100-200 bp cfDNA,有效去除大片段DNA和gDNA的污染,同时具有操作简单、回收率高(>95%)等优势。使用本品获得的cfDNA产物,可直接应用二代测序文库构建、克隆、酶切、连接等反应。本产品中提供的所有试剂组分均经过严格质检,zui高程度保障产品优异性能与批间稳定性。
运输与保存方法
冰袋运输。2-8℃保存,效期一年。避免冷冻!
注意事项
1)为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
2)磁珠使用前须在室温平衡至少30 min。
3)80%乙醇需现用现配,否则将影响回收效率。
4)进行长度分选时,初始样品体积需≥50 μL,不足时请用超纯水补齐。样品体积太小,将导致移液误差增大,进而影响分选的准确性。
使用方法
1. 准备工作
将磁珠由冰箱中取出,室温平衡至少30 min。配制80%乙醇。
2. 长度分选(双轮法)
长度分选操作流程如图1所示,具体操作如下。
图1 双轮分选操作流程。
表1磁珠cfDNA-片段回收推荐比例
cfDNA-片段长度 | 100-200 bp |
*轮体积比(Beads:DNA) | 0.47× |
第二轮体积比(Beads:DNA) | 0.33× |
注:“×”表示样品DNA体积。若样品DNA体积为100 mL,则*轮磁珠使用体积为0.47×100 mL=47 mL;第二轮磁珠使用体积为0.33×100 mL=33 mL。
1)请涡旋振荡或充分颠倒磁珠以保证混匀。
2)根据要求,参考表1向DNA溶液中加入第一轮分选磁珠,涡旋混匀或移液器吹打10次混匀。
3)室温孵育5 min。
4)将离心管短暂离心并置于磁力架中,待溶液澄清后(约5 min),小心转移上清到干净的离心管中。【注意:转移上清时,请勿吸取磁珠,即使微量残留都将影响后续文库质量。】
5)参考表1向上清中加入第二轮分选磁珠。
6)涡旋混匀或移液器吹打10次混匀,室温静置5 min。
7)将离心管短暂离心并置于磁力架中,待溶液澄清后(约5 min),小心移除上清。
8)保持EP管始终处于磁力架中,加入200 μL新鲜配制的80%乙醇漂洗磁珠,室温孵育30 sec,小心移除上清。
9)重复步骤8。
10)保持离心管始终处于磁力架中,开盖干燥磁珠至刚刚出现龟裂(约5 min)。【注意:切记磁珠不要干燥时间太久,磁珠干燥过度将影响纯化效果。】
11)将离心管从磁力架中取出,加入适量ddH2O(≥20 μL),涡旋振荡或使用移液器轻轻吹打充分混匀,室温静置5 min。
12)将离心管短暂离心并置于磁力架中分离磁珠和液体。待溶液澄清后(约5 min),小心吸取上清至干净的管中,即完成分选。
3. 文库大小分选参考条件
使用Hieff NGSTM cfDNA Clean Beads以0.47×/0.33×的双轮分选比例,回收100-200 bp DNA-片段。结果显示:Hieff NGSTM cfDNA Clean Beads的回收率高达95%以上(表2),且几乎*去除了大片段污染(图2)。
图2. 模拟cfDNA纯化结果。
阴性对照为20 bp ladder和100 bp ladder等比例混合物(红色),使用cfDNA Clean Beads对混合物进行0.47×/0.33×分选(绿色和蓝色,平行重复)。
表2. 双轮回收后100-200 bp各片段的回收率统计。
DNA-片段位置 | 片段信号值(FU) | 回收率 | |||
对照 | 0.47×/0.33×回收 | ||||
P1 | 3.9 | 3.7 | 3.9 | 3.8 | 97.44% |
P2 | 3.1 | 3.2 | 2.9 | 3.05 | 98.39% |
P3 | 3.1 | 2.9 | 3.0 | 2.95 | 95.16% |
P4 | 3.1 | 3.0 | 3.0 | 3.0 | 96.77% |
HB170811