单核细胞趋化(诱导)蛋白-5 ELISA KIT（ELISA试剂盒）

单核细胞趋化(诱导)蛋白-5 ELISA KIT（ELISA试剂盒）标本必须为液体，不含沉淀。包括血清、血浆、尿液、胸腹水、脑脊液、细胞培养上清、组织匀浆等。1ml的全血可得到0.5ml的血清或血浆。每个标本量收集体积＝100ul×检测种类。

◇      血清：室温血液自然凝固10-20分钟后，离心20分钟左右(2000-3000转/分)。收集上清。如有沉淀形成，应再次离心。
◇      血浆：应根a据试剂盒的要求选择EDTA、柠檬酸钠或肝素作为抗凝剂，加入10％(v/v)抗凝剂(0.1M柠檬酸钠或1% heparin 或2.0%EDTA.Na2)混合10-20分钟后，离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。如有沉淀形成，应再次离心。
◇      尿液、胸腹水、脑脊液：用无菌管收集。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。如有沉淀形成，应再次离心。
◇      细胞培养上清：检测分泌性的成份时，用无菌管收集。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。检测细胞内的成份时，用PBS(PH7.2-7.4)稀释细胞悬液，细胞浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融，以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。
◇      组织标本：切割标本后，称取重量。加入一定量的PBS，缓冲液中可加入1μg/L蛋白酶抑制剂或50U/ml的Aprotinin(抑肽酶)。用手工或匀浆器将标本匀浆充分。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清置于-20度或- 70度保存，如有必要，可以将样品浓缩干燥。分装后一份待检测，其余冷冻备用。

1.快速提取：15分钟快速基因组DNA提取，无需组织裂解试剂，实验过程无需调pH值、离心；
2.快速分型扩增：45分钟快速高效扩增；
3.扩增试剂：分热启动型和非热启动型两种，含有染料，扩增后可直接电泳；
4.减少繁琐步骤，降低污染风险；
5.高通量操作：可在PCR仪上批量处理样本；
6.扩增产物末端加A，且可进行下游酶切、测序等；
7.节约成本，提取+扩增，合计低于6元。

属进口分装试剂盒类产品。公司还有血清、细胞、抗体、细胞因子、实验试剂、移液器、实验耗材、实验仪器及实验技术服务等等产品，欢迎新老客户。

水貂的绿脓杆菌外毒素A能用小鼠的ELISA试剂盒检验吗？

导向抗癌药物—冻干重组人促黄体激素释放激素-绿脓杆菌外毒素A融合蛋白已进入“我国水貂病毒性肠炎病原分离、鉴定、特异性诊断及同源组织灭活疫苗的研究”

小鼠尾静脉采血，如何从全血中制备ELISA用血清，有什么原则吗？

放4℃过夜，然后4℃离心，取上清即可用于ELISA。

【生物分子】 抗生素/抗真菌素 维生素 氨基酸 核苷酸 脂 糖类 白三烯 前列腺素 药物结合物 抗氧化剂 药理活性化合物 类固醇激素结合物 半抗原反应 半抗原载体结合物 放射性核素 血小板活化素 tRNA 活性染料和化合物 亲和素/链霉亲和素
【蛋白质/抗原/多肽】 免疫球蛋白 封闭肽 人蛋白和抗原 小鼠蛋白和抗原 细菌蛋白和抗原 病毒蛋白和抗原 植物蛋白和抗原 其它蛋白和抗原 细胞质蛋白 总蛋白 膜蛋白 核蛋白 细胞裂解和提取物 线粒体蛋白 细胞裂解 组织提取 重组细胞因子 
【常用生化试剂】EDTA DTT Tris SDS MOPS HEPES 水 分子生物学缓冲液 蛋白生化缓冲液 去垢剂 染色试剂 溶剂 酸碱 化学试剂 其它生化试剂
【PCR/RT-PCR/qPCR】PCR试剂 PCR对照 特异性PCR试剂盒 PCR克隆试剂盒 RNA 载体及构建 PCR克隆载体 M13克隆载体 细菌克隆载体 文库及构建 cDNA文库 基因组文库 噬菌体展示文库
【酶】限制性内切酶 蛋白酶 核酸酶 激酶 聚合酶 连接酶
【cDNA及合成纯化】cDNA全长基因 RNA cDNA合成 cDNA相关试剂
【核酸/蛋白合成】Oligo纯化 核酸合成柱 核酸合成试剂
【克隆与表达】克隆基因 克隆试剂盒 克隆筛选
【表达分析】 Northern印迹分析 分支DNA和mRNA定量
【蛋白分析】 PAGE凝胶制备 蛋白电泳试剂 预制蛋白凝胶
【核酸纯化】 DNA凝胶纯化 DNA提取纯化 PCR产物纯化
【RNAi技术】 siRNA 反义寡核苷酸 RNAi定量 RNAi文库
【蛋白检测】 Western印迹 报告基因检测 蛋白检测试剂盒
【实验动物】 转基因动物 小鼠 大鼠 模式动物
【临床检测试剂】 生化检测 遗传学检测 血液检测
【相关检验试剂】 食品安全检测 药品安全检测
【蛋白纯化】 蛋白提取 蛋白透析 蛋白定量 蛋白稳定
【细胞培养】 血清 血清替代物 细胞培养基 细胞 细胞株 感受态细胞 新鲜细胞分离
【干细胞】 干细胞/祖细胞 原代细胞 干细胞培养基
【蛋白修饰】 蛋白标记 载体蛋白结合 其它
【细胞生物学检测】 细胞凋亡 细胞分离 细胞增殖
【药物筛选】 荧光素细胞活力/增殖/毒性检测
【免疫检测】 放射性免疫检测 化学发光免疫检测

　　Q1. 液体培养基的保存是冷藏好？还是冷冻好？

　　要冷藏！！因为液体培养基经冷冻后再经溶化时，其溶液的pH值会发生改变，溶液往往变碱，某些成分溶解也会受到影响对细胞生长不利。故液体培养基一定要存放在冷藏箱中，通常液体培养基在冷藏条件下可存放6个月 ~ 一年。

　　Q2. 液体培养基中谷氨酰胺的作用，及使用方法。

　　几乎所有的细胞对谷氨酰胺有较高的要求，细胞需要谷氨酰胺合成蛋白质，在缺少谷氨酰胺时，细胞生长不良而死亡。所以，各种培养液中都含有较大量的谷氨酰胺。谷氨酰胺在溶液中很不稳定，应置-20 ?C冰冻保存，用前加入培养基中储存两周。

 现在一般完整的试剂盒应该有一下几个组成：

 （1）已包被抗原或抗体的固相载体（免疫吸附剂）；

（2）酶标记的抗原或抗体（结合物）；

（3）酶的底物；

（4）阴性对照品和阳性对照品（定性测定中），参考标准品和控制血清（定量测定中）；

（5）结合物及标本的稀释液；

（6）洗涤液，在板式ELISA中，常用的稀释液为含0.05%吐温20磷酸缓冲盐水；

（7）酶反应终止液，常用的HRP反应终止液为硫酸，其浓度按加量及比色液的体积而异，在板式ELISA中一般采用3mol/L。

1. 放射免疫测定 放射免疫测定是将同位素分析的高灵敏度与抗原抗体反应的特异性相结合，方法大多采用竞争法原理。待检的细胞因子与放射性同位素标记的细胞因子竞争与细胞因子抗体（多克隆抗体或单克隆抗体）结合，再通过分离剂分离结合状态的标记物，计数后根据标准曲线即可计算出细胞因子的量。本法具有灵敏度高，特异性强、准确性好等特点。 

2.ELISA测定 2-1.酶联免疫斑点（ELISPOT） 检测试剂盒是基于定量夹心ELISA法原理，将刺激后的细胞滴加到包被在贴PVDF微孔中，放置于37℃孵育。在孵育的过程中，细胞分泌的细胞因子即会被包被的抗体所捕获，以下的过程与一般的ELISA实验相同，用不溶性的酶联底物进行显色，每一个显色点（斑点）既代表一个分泌细胞因子的细胞。通过的ELISPOT分析仪或在显微镜下进行计数，就可以进行分析。

ELISPOT法用于检测单个细胞分泌的细胞因子，综合了普通ELISA方法的高特异性和准确定量的优点，而且具有生物活性分析得出与功能相关的结果的优点。 2-2.双抗夹心ELISA法 双抗体夹心法需制备针对细胞因子不同位点的两个单克隆抗体，一个抗体作为固相抗体用于包被，另一个作为标记抗体。可采用常规双抗夹心法，也可采用一步法。由于血清中细胞因子的含量很低。

常规ELISA法不能满足要求，需引入生物素－亲合素系统来提高灵敏度，即加入样品后加入生物素标记的另一个抗体，再加入亲合素及生物素化的酶，再加入底物进行显色，颜色与待检的细胞因子量呈正比。