肝癌细胞系，LM-3

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• 如何选用培养基？ 
  培养某一类型细胞没有固定的培养条件。在MEM中培养的细胞，很可能在DMEM或M199中同样很容易生长。总之，*MEM做粘附细胞培养、RPMI-1640做悬浮细胞培养，各种目的无血清培养的*是AIM V培养基（SFM）。在开始进行新的细胞培养时，可以参考下表所列的条件： 
  细胞系 细胞类型 种 组织 推荐使用的培养基 

  KG-1 骨髓白细胞 人 红白血病病人骨髓 IMDM, 20% 胎牛血清 
  L2 上皮细胞 大鼠 肺 F-12K, 10%胎牛血清 
  L6 大鼠 骨骼肌成肌细胞 DMEM, 10% 胎牛血清 
  LLC-WRC 256 上皮细胞 大鼠 癌 Medium 199, 5% 马血清 
  McCoy 成纤维细胞 小鼠 未知 MEM, 10% 胎牛血清 
  MCF7 上皮细胞 人 乳腺癌 MEM, 10% 胎牛血清 NEAA, 10ug/ml 胰岛素 
  WEHI-3b 类巨噬细胞 小鼠 骨髓单核细胞白血病 DMEM, 10% 胎牛血清 
  WI-38 上皮细胞 人 胚胎肺 BME, 10% 胎牛血清 
  WISH 上皮细胞 人 羊膜 BME, 10% 胎牛血清 
  WS1 人 胚胎皮肤 MEM, 10% 胎牛血清 和NEAA 
  XC 上皮细胞 大鼠 肉瘤 MEM, 10% 胎牛血清 和NEAA 
  Y-1 上皮细胞 小鼠 肾上腺瘤 F-10, 15% 马血清和 2.5% 胎牛血清 

  COS-1 成纤维细胞 猴 肾 DMEM, 10% 胎牛血清 
  COS-3 成纤维细胞 猴 肾 DMEM, 10% 胎牛血清 
  COS-7 成纤维细胞 猴 肾 DMEM, 10% 胎牛血清 
  CRFK 上皮细胞 猫 肾 MEM, 10% 胎牛血清 和NEAA 
  CV-1 成纤维细胞 猴 肾 MEM, 10% 胎牛血清 
  D-17 上皮细胞 狗 骨肉瘤 MEM, 10% 胎牛血清 和NEAA 
  Daudi 成淋巴细胞 人 淋巴瘤病人血液 RPMI-1640, 10% 胎牛血清 
  GH1 上皮细胞 大鼠 垂体肿瘤 F-10, 15% 马血清和 2.5% 胎牛血清 
  GH3 上皮细胞 大鼠 垂体肿瘤 F-10, 15% 马血清和2.5% 胎牛血清 

• 3T6 成纤维细胞 小鼠 胚胎 DMEM, 10% 胎牛血清 
  A549 上皮细胞 人 肺癌 F-12K, 10%胎牛血清 
  A9 成纤维细胞 小鼠 结缔组织 DMEM, 10%胎牛血清 
  AtT-20 上皮细胞 小鼠 垂体肿瘤 F-10, 15% 马血清和2.5% 胎牛血清 
  BALB/3T3 成纤维细胞 小鼠 胚胎 DMEM, 10% 胎牛血清 
  BHK-21 成纤维细胞 仓鼠 肾 GMEM, 10% 胎牛血清 或MEM, 10% 胎牛血清 和NEAA 
  BHL-100 上皮细胞 人 乳房 McCoy'5A, 10% 胎牛血清 
  BT 成纤维细胞 牛 鼻甲骨细胞 MEM, 10% 胎牛血清 和 NEAA 
  Caco-2 上皮细胞 人 结肠腺癌 MEM, 20% 胎牛血清 和NEAA 

常见的污染如下：

1、细菌：细菌在普通倒置显微镜下为黑色细沙状，根据感染细菌的不同，可有不同的外形，培养液一般会浑浊变黄，对细胞生长影响明显。

2、霉菌：培养液是清亮的，倒置显微镜下无杂质，37度孵箱培养2-3天，仍清亮，但出现絮状杂质，镜下可见呈细丝状的团状漂浮物，可看到明显的菌丝，细胞仍可生长，但时间长之后，细胞的活力状态变差，
用硫酸铜溶液擦拭CO2孵箱内，再把水盘里也加上饱和量的硫酸铜。或者在培养箱的托盘加入饱和的消毒磷酸氢二钠高盐液体,可以防止霉菌污染。

3、支原体：黑色的，好象多为多形，培养液一般培养液一般会浑浊，原体感染，国内血清很多都没有做支原体阴性检测，而支原体是牛血清中zui常见的微生物之一。而且它不能用过滤的办法除去。支原体感染细胞以后，细胞病变不很明显，只是慢慢死去。

4、黑蛟虫：可以穿透滤膜，也可以通过空气传播，低倍下为黑色点状，高倍下可看见黑色的小虫游来游去，培养液也是不浑的，一般不会太影响，细胞还是可以用的。

5、真菌：一般培养液清亮，不变色，镜下有丝状物，有些真菌开始很像死细胞碎片，只是它很多很多的小块很清楚，象珊瑚状，不象细胞碎片分不清，慢慢的会长出很细的黑色丝状物。真菌生长的比较慢，不象细菌那么容易被发现，但是一旦发现有它的存在细胞就被污染了，也很难救活了。

6、原虫：培养液可轻微浑浊，显微镜下那些细小的点状物数量非常多，轻微活动，细胞虽然可以生长但繁殖速度却明显减慢，而且细胞状态不好，边缘不清楚，细胞不透亮。他们与细胞可共生但会与细胞争夺营养。这种共生是非常普遍的，但他们的数量小，细胞站优势所以不会影响到细胞的正常生长，只有当他们到达一定的数量时就会影响到细胞的生长，zui终形成恶性循环。

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