Incucyte® 实时活细胞分析系统是一款革命性的细胞成像设备，可以实现在培养箱内无限时间的连续观察。用户友好的实验设置和分析，以及精准的各种细胞指标计算，使得许多用户对它青睐有加。

Incucyte® 在细胞水平的体外实验中有着广泛应用。话不多说，让我们用文章数量发话！

去除预印版，在2023年第三季度，陈老师收集到了国内近30个不同单位发表的40余篇文章，汇总如下（文献列表在文末哦）。

表1. 2023 Q3 Incucyte® 发表文章第一作者单位分布

从文章的发表单位来看，许多单位发表了多篇文章，如：中山大学附属第六医院、复旦大学医学院、四川大学华西医院、北京协和医学院等。利用Incucyte®，可以高效地获取实时细胞信息，快速得到可信的研究成果。值得一提的是，中山大学附属第六医院仅在一个季度，就发了7篇文章！这足以说明Incucyte® 因其简单易用、可在短时间内生成多个精确数据的优点，已然成为发表高分文章的利器！

Incucyte® 的应用范围非常广泛。从第三季度发表的文章上来看，除了传统的细胞增殖活性和划痕迁移实验外，还包括血管生成等多种应用。与上半年相比，使用Incucyte® 发表的文章数量呈现有稳步增长的趋势。

今天，陈老湿就挑选几篇带有新应用
国内文章进行介绍：

复旦大学 划痕实验基因筛选^[1]

^{表观遗传调节因子（ERF）的失调在肿瘤的进展中起着重要作用。为了确定哪种ERF有助于抑制结直肠癌（CRC）中的肿瘤细胞增殖或迁移，研究人员使用siRNA敲低了HT29细胞中的591种ERF基因，然后使用Incucyte® 高通量实时活细胞成像系统进行伤口愈合测定，以检查肿瘤细胞的迁移能力。在这些ERF中，针对AF9的四个独立的siRNA敲低AF9表达显著促进了伤口愈合的能力。锌指转录因子蛋白（SNAIL）被用作该筛选系统中的阳性对照。AF9在CRC中表现出下调，并与CRC患者的生存期延长呈正相关。体外和体内测定证明，AF9的消耗可以促进细胞增殖、迁移以及糖酵解。肠上皮细胞中MLLT3（AF9）的敲除显着增加了嘧啶甲烷-葡聚糖硫酸钠（AOM / DSS）诱导的肿瘤形成。}

591个基因，每个基因4种siRNA，还有复孔!一块96孔板检测6个基因，一共需要100块96孔板，使用Incucyte® 一次性可以扫描6块板并提供划痕工具，还能迅速对划痕平均距离等进行计算，这大大提高可划痕测试通量。

华侨大学 病毒侵染测定^[2]

^{重组腺相关病毒（rAAV）是基因治疗体内递送中具有吸引力的载体，但其对细胞和组织的特异性限制了其在临床上的应用。表皮生长因子受体-蛋白酪氨酸激酶（EGFR-PTK）能够负调节rAAV转导，使得EGFR阳性细胞几乎不允许rAAV转导。本研究构建了一种新型的rAAV-miRNA133b载体，该载体共表达miRNA133b（可敲低EGFR表达）和转基因，并研究了其在体内和体外的转导效率。通过使用Incucyte® 活细胞成像等方法，分析了miRNA133b对rAAV2转导的影响及其机制。结果表明，miRNA133b可促进rAAV2转导，且影响仅限于EGFR阳性细胞。而ss-rAAV2-Fluc-miRNA133b展现出了抗肿瘤作用。rAAV-miRNA133b载体可能成为一种有前景的平台，用于递送各种转基因以治疗EGFR阳性细胞相关疾病（如非小细胞肺癌等）。}

相比于流式方法，Incucyte® 无需进行消化细胞等预处理步骤；而与其他成像设备相比，它的操作简单易用，并且能够进行AI辅助分析。

中国科学院国家生物信息中心  血管生成^[3]

^{由于衰老的复杂性，我们的实际生物年龄并不总是与实际年龄一致，因此开发能准确评估衰老的工具显得尤为重要。中国科学院国家生物信息中心刘光慧团队建立了一个女性衰老时钟，该时钟包括了与免疫、脂质代谢、激素调节和组织健康相关的多组学水平的年龄相关特征。他们将30多岁到50多岁确定为女性老龄化的过渡期，认为这是监测衰老的重要时期。研究人员还发现，激素替代疗法可以部分延缓几个衰老时钟的步伐，并缓解多种与衰老相关的标志物。在这项研究中，Incucyte® 主要用于检测一些物质对主动脉内皮细胞(Human Aortic Endothelial Cells)的血管生成能力。}

^图5. Incucyte® 的血管生成实验发现：一些非激素类物质（肉豆蔻酸等）能增强血管生成能力

^{Incucyte® 有专门的血管生成分析模块哦！}

^{中山大学癌症中心 细胞共培养竞争模型测定[4]}

^{在细胞转染后，建立转染细胞与未转染细胞的竞争生长模型对于衡量转染细胞的生长增殖能力至关重要。这篇文章中引入了一种新的方法，称为竞争性增殖测量（ComProliM），以准确量化细胞生长速率。该方法涉及共培养两种不同类型的细胞，并定义了一个关键参数，即 ComProliM 指数 （CPMI）。CPMI 是两种细胞数量比例对数和两种细胞数量总数对数进行线性回归的斜率。利用Incucyte® 设备，我们可以轻松实现这种检测。每隔4个小时，我们测定两种贴壁细胞（分别带有红色和绿色荧光）的数量（荧光面积），以同时判定两种细胞的增殖。然后，我们使用每个时间点的两种细胞数的比值的对数和两种细胞总量进行线性回归，从而计算CPMI。}

文中提到，相比于MTT、流式等终点法，Incucyte® 的方法具有通量高、操作简单、可以在短时间内获得大量数据的优点。

^{为什么Incucyte® 如此受欢迎呢？}

• 培养箱内无限时间的连续观察，最短几分钟间隔拍摄，减少人力，防止过多操作对细胞的伤害

• 6个板位，分别独立设置检测程序，可以兼容各种孔板和培养皿，通量高；比如第一篇和第四篇文章就用到了Incucyte® 的高通量优势

• 高效简便的模块化软件设置和数据分析，输出图片、视频、生长曲线等多指标多参数

• > 100种优化过的配套荧光试剂和耗材及详尽的protocol

总而言之，您只管放好细胞，剩下的就交给Incucyte® 吧！