两天5篇《Nature》！Incucyte杀疯了……
时间：2024-11-05 阅读：131
长时程活细胞成像系统Incucyte®因其简便的实验设置和分析流程、以及广泛的应用方向，深受用户喜爱。在体外细胞水平的实验中发挥着重要作用。引用其数据的CNS正刊上论文数量众多，目前使用到Incucyte®发表的CNS正刊总数已经达到约200篇，往期链接如下：
活细胞成像刷屏！一天两篇CELL揭秘神经退行性疾病和肿瘤免疫新疗法
一天三篇CNS，Incucyte® 开启细胞研究新速度
一周3篇Nature：Incucyte® 上演科研帽子戏法！
最近的2024年10月，利用Incucyte® 发CNS正刊的数量又达到了新高度，两天5篇NATURE!
他们又是如何应用Incucyte® 的呢？
免疫细胞和靶细胞共培养[1]
中毒性表皮坏死松解症（TEN）是一种由常见药物诱导的致命皮肤反应，已成为一个新兴的公共卫生问题。TEN患者会因角质形成细胞死亡，而出现严重和突然的表皮脱离。通过蛋白质组学分析，发现TEN患者免疫细胞和角质形成细胞区室中I型和II型干扰素的显著富集。Incucyte® 体外实验发现，使用JAK抑制剂托法替尼（ tofacitinib）降低了角质形成细胞的细胞毒性。体内口服给药改善了两种不同的TEN小鼠模型的临床和组织学疾病严重程度。
图1. Incucyte® 测试：自体共培养模型中，活化的外周血单核细胞（PBMC）在5小时内有效杀死角质形成细胞，并且这种作用被托法替尼以剂量依赖性方式抑制。每隔两个小时测试一次，对死亡的角质形成细胞进行统计。
Incucyte® 有多个板位，可以满足多个实验组的高通量测定。
细胞凋亡[2]
三阴性乳腺癌 （TNBC）因其高度侵袭性和高复发率而令人谈虎色变，迫切需要开发更有效的治疗方法。本文发现，AKT抑制剂与组蛋白甲基转移酶EZH2抑制剂的药物具有协同作用，并在体内多个TNBC模型中促进持续的肿瘤消退，明确了其药理作用。Incucyte® 被用于体外检测药物对肿瘤细胞系的杀伤作用。
图2. Incucyte® 测试结果：NucLight Rapid Red试剂 （Sartorius，4717）标记细胞，用Cytotox Green （Sartorius，4633）监测细胞毒性。每2小时采集一次图像，持续5天。使用Incucyte®软件通过量化overlay的NucLight-red和Cytotox-green双阳性细胞数（即死亡的细胞数）除以 NucLight-red 阳性细胞的总数来确定细胞毒性细胞的百分比。
Incucyte®有完善的活细胞试剂，并提供相应的protocol，以及overlay分析等软件功能。
划痕实验[3]
人类产前皮肤由先天免疫细胞（包括巨噬细胞）组成，但这些细胞是否仅在免疫方面发挥作用，还是在形态发生中具有其他功能，尚不清楚。本文汇编了一份全面的产前人类皮肤多组学参考图谱，结合单细胞和空间转录组学数据，表征了皮肤的微解剖组织生态位。该图谱揭示了非免疫细胞和免疫细胞之间的串扰是毛囊形成的基础，与无疤痕伤口愈合有关，对皮肤血管生成至关重要。
图3. Incucyte® 划痕测试：成纤维细胞与巨噬细胞共培养可以增加伤口愈合。
Incucyte® 有专门的工具可以方便的创造一致的划痕。
两种细胞的竞争[4]
晚期尿路上皮癌（UC）是一种经常致命的疾病，具有显著的遗传异质性。化疗会诱导数百个晚期亚克隆突变的爆发。通过基因组计算工具观察到，形成染色体外DNA （ecDNA）的SV（复杂结构变异）具有频繁的高拷贝数环状扩增子特征，例如尿路上皮癌中的大多数 CCND1（G1/S-特异性周期蛋白-D1基因），并包含额外的DNA片段并导致治疗耐药性的进化。在竞争试验中，在顺铂或载体对照存在下，共培养等数量的具有GFP标记的空载体和mCherry标记的CCDN1游离型ecDNA的UMUC1细胞（CCDN1 UMUC1），使用Incucyte®活细胞成像系统测量 mCherry/GFP荧光信号的比率来监测对化疗的适应性。
图4. 用Incucyte®监测4天的mCherry/GFP细胞比例示意图（6个小时拍摄一次），以追踪肿瘤细胞对化疗的适应性
图5. CCND31 UMUC1细胞与对照细胞的比率，化疗药物顺铂的处理组明显高于对照，说明CCND31 UMUC1细胞对化疗有更佳的适应性
Incucyte®有多个荧光通道可以对多种细胞进行追踪。
这些文章看重了
Incucyte®什么优点呢？
培养箱内可长达数周的连续观察，最短几分钟间隔拍摄，减少人力，防止过多操作对细胞的伤害和移动多个板位，分别独立设置检测程序，可以兼容各种孔板和培养皿，通量高具有划痕，肿瘤球，类器官，趋化，血管生成等多个分析拍摄模块，并配套相应的耗材高效简便的模块化软件设置和数据分析，输出图片、视频、生长曲线等多指标多参数；捕捉细胞每个细节，使得结果更加准确大于100种优化过的活细胞专用荧光试剂、耗材及详尽的Protocol实验形式多样化：定性，两者结合，协同/竞争实验，垂钓文章数大于16000篇，认可度高只要放好您的细胞，其他交给Incucyte®吧！祝愿大家都能用Incucyte®发好文章！
Incucyte®长时程活细成像系统应用文集
-参考文献-
[1]Spatial proteomics identifies JAKi as treatment for a lethal skin disease | Nature
[2]AKT and EZH2 inhibitors kill TNBCs by hijacking mechanisms of involution | Nature
[3[A prenatal skin atlas reveals immune regulation of human skin morphogenesis | Nature
[4]The interplay of mutagenesis and ecDNA shapes urothelial cancer evolution | Nature