人癌胚抗原（CEA）含量检测原理

背景介绍：

癌胚抗原（CEA）描述了一组参与细胞粘附的高度相关的糖蛋白。它通常在胎儿发育过程中的胃肠组织中产生，但在出生前停止产生，所以CEA在健康成年人血液中的含量通常很低（约2-4纳克/毫升）。然而，在某些类型的癌症中血清水平会升高，这意味着它可以在临床试验中作为肿瘤标志物使用。重度吸烟者的血清水平也会升高。CEA是糖基磷脂酰肌醇（GPI）细胞表面锚定的糖蛋白，其专门的硅藻糖基化糖型可作为功能性结肠癌L-选择素和E-选择素配体，可能对结肠癌细胞的转移扩散至关重要。从免疫学角度看，它们的特征是CD66分化簇的成员。这些蛋白包括CD66a、CD66b、CD66c、CD66d、CD66e、CD66f。

检测原理：

试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。往预先包被人癌胚抗原（CEA）捕获抗体的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并彻-底洗涤。用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的人癌胚抗原（CEA）呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD 值），计算样品浓度。

试剂盒组成

注：

1.  标准品浓度依次为：40、20、10、5、2.5、1.25 ng/mL

2.  经过大量正常标本检验，标本的正常浓度值均在试剂盒提供的检测范围内，实验过程中直接取50μL样本上样即可。当有部分样本值超过最大标准品浓度时，可用样本稀释液将标本进行适当稀释后再进行实验。

操作步骤

1.  从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用自封袋密封放回4℃。

2.  设置标准品孔和样本孔,标准品孔各加不同浓度的标准品50μL；

3.  待测样本孔先加待测样本50μL，空白孔不加。样本不足的情况下，上样量最少10μL。操作方法：待测样本孔先加待测样本10μL，再加样本稀释液40μL。

4.  除空白孔外,标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的检测抗体100μL，用封板膜封住反应孔，37℃水浴锅或恒温箱温育60min。

5.  弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液（350μL），静置1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板5次（也可用洗板机洗板）。

6.  每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。

7.  每孔加入终止液50μL，15min内，在450nm波长处测定各孔的OD值。