上海添时T960 PCR仪的改进与完善史
时间：2015-03-13 阅读：2320
T960 PCR仪就是利用DNA聚合酶对特定基因做体外或试管内In Vitro的大量合成，基本上它是利用DNA聚合酶进行专一性的连锁复制。目前常用的技术，可以将一段基因复制为原来的一百亿至一千亿倍。根据DNA扩增的目的和检测的标准，可以将T960 PCR仪分为普通T960 PCR仪，梯度T960 PCR仪，原位T960 PCR仪，实时荧光定量T960 PCR仪四类。
T960 PCR仪的改进与完善
Mullis初使用的DNA聚合酶是大肠杆菌 DNA 聚合酶 I 的Klenow片
段，其缺点是：
①Klenow酶不耐高温， 90℃会变性失活，每次循环都要重新加。
②引物链延伸反应在37℃下进行，容易发生模板和引物之间的碱基错配，其T960 PCR仪产物特异性较差，合成的
DNA片段不均一。此种以Klenow酶催化的T960 PCR仪技术虽较传统的基因扩增具备许多突出的优点，
但由于Klenow酶不耐热，在DNA模板进行热变性时，会导致此酶钝化，每加入一次酶只能完成
一个扩增反应周期，给T960 PCR仪技术操作程序添了不少困难。这使得T960 PCR仪技术在一段时间内没能引起生物医学界的足够重视。
1988年初，Keohanog改用T4 DNA聚合酶进行T960 PCR仪，其扩增的DNA片段很均一，真实性也较高，只有所期望的一种DNA片段。但每循环一次，仍需加入新酶。
1988年Saiki 等从温泉中分离的一株水生嗜热杆菌thermus aquaticus 中提取到一种耐热DNA聚合酶。 此酶具有以下特点：①耐高温，在70℃下反应2h后其残留活性大于原来的90%，在93℃下反应2h后其残留活性是原来的60%，在95℃下反应2h后其残留活性是原来的40%。②在热变性时不会被钝化，不必在每次扩增反应后再加新酶。③大大提高了扩增片段特异性和扩增效率，增加了扩增长度2.0Kb。由于提高了扩增的特异性和效率，因而其灵敏性也大大提高。为与大肠杆菌多聚酶IKlenow片段区别，将此酶命名为TaqDNA多聚酶Taq DNA Polymerase。此酶的发现使T960 PCR仪广泛的被应用。