解决方案丨鸡肝中环丙氨嗪残留量的测定
时间：2023-02-14 阅读：525
环丙氨嗪又名灭蛆灵、灭蝇胺，是一种新型的昆虫生长调节剂，对双翅目昆虫幼虫体有杀灭作用，尤其对在粪便中繁殖的几种常见的苍蝇幼虫（蛆）有很好的抑制和杀灭作用。它和一般灭蝇药的不同点是它杀幼虫-蛆，而一般灭蝇药只杀成蝇且毒性较大。该药具有触杀和胃毒作用，并有强内吸传导性，持效期较长，但作用速度较慢。短期内大量接触灭蝇胺对眼睛、皮肤有刺激作用，甚至引起急性中毒，产生恶心、呕吐、眩晕等健康危害，长期摄入对人体健康有不良影响。
对于动物性食品中环丙氨嗪残留量的检测现可依据国家标准GB 31658.12-2021《动物性食品中环丙氨嗪残留量的测定 高效液相色谱法》，本方法参考上述标准，将试料中的环丙氨嗪，用三氯乙酸/乙腈溶液提取，混合阳离子交换固相萃取柱净化，高效液相色谱测定，外标法定量。
图-1 环丙氨嗪的结构式
仪器和耗材
1仪器
Fotector Plus高通量全自动固相萃取仪
AH 50全自动均质器
MPE系列高通量真空平行浓缩仪
Auto EVA 80 全自动氮吹浓缩仪
Agilent 1260高效液相色谱
2 耗材
MCX固相萃取柱（60 mg/3mL，P/N：RC-204-72855）
3 试剂
乙腈（色谱纯）
甲醇（色谱纯）
正己烷（色谱纯）
乙酸乙酯（色谱纯）
25 mmol/L乙酸铵溶液：取乙酸铵0.19 g，用水950 mL溶解，用乙酸调pH至5.0，用水稀释至1000 mL。
1%三氯乙酸溶液：取三氯乙酸1 g，用水溶解并稀释至100 mL。
提取液：取1%三氯乙酸溶液15 mL，用乙腈稀释至100 mL。
0.1 mol/L 盐酸溶液：取盐酸9 mL，用稀释至1000 mL。
5%氨水甲醇溶液：取氨水5 mL，用甲醇稀释至100 mL。
流动相：取25 mmol/L 乙酸铵溶液40.0 mL，用乙腈定容至1000 mL。
样品制备
称取试样5 g（准确到±0.01 g），于50 mL离心管中，使用AH 50全自动均质器自动加入提取液15 mL，并均质30 s。5000 r/ min离心5 min，取上清液于分液漏斗中，再于残渣中加提取液10 mL，重复提取一次，合并两次上清液，加正己烷30 mL，振摇2 min，静置使分层。收集下层液体于MPE浓缩杯中，于MPE真空平行浓缩仪50 ℃水浴中浓缩至1 mL，转至10 mL刻度离心管中，用提取液润洗浓缩杯2次，每次2 mL。合并两次提取液，以10000 r/min离心5 min，取上清液，备用。
1 净化
取MCX固相萃取柱安装在Fotector Plus高通量全自动固相萃取仪上，依次用甲醇5 mL、水3 mL活化，备用液过柱（控制流速约1.0 mL/ min）。依次用甲醇3 mL、0.1 mol/L盐酸溶液3 mL、水3 mL和甲醇3 mL洗柱，弃去洗出液。用5%氨水甲醇5 mL洗脱，收集洗脱液。洗脱液于EVA 80全自动氮吹浓缩仪上50℃氮吹吹干，用流动相1 mL溶解残余物，涡旋混匀，过滤，待上机分析。
具体的固相萃取方法见图-2。
2 固相萃取净化条件
图-2 Fotector Plus固相萃取方法
液相检测条件
1 液相条件
2 色谱图
图-3 环丙氨嗪标准溶液色谱图（200 µg/L）
图-4 鸡肝基质加标环丙氨嗪色谱图（25 µg/kg）
结果与讨论
为了验证该方法的回收率，本实验向鸡肝样品中加入环丙氨嗪标准品进行低、中、高三种浓度梯度的基质加标回收验证（n=6），数据如表-1所示。加标回收率在74.5%~77.9%之间，RSD值控制在5%以内。说明该方法能够运用于动物性食品中环丙氨嗪残留量的检测。
样品加标回收率及RSD值（n=6）
总结
本解决方案操作方便、提取和浓缩效率高、重现性好，符合GB 31658.12-2021《动物性食品中环丙氨嗪残留量的测定 高效液相色谱法》要求。
均质过程采用AH 50全自动均质器，仪器自动加液，通过水洗、溶剂洗、超声洗三种刀头清洗方式，杜绝样品间交叉污染。
MPE真空平行浓缩仪实现批量、快速、高效的浓缩过程，采用水浴加热和平稳的圆周震荡模式，一批次完成16位大体积浓缩，同时保证样品的平行性和可靠性。
浓缩完成后配合Fotector Plus高通量全自动固相萃取仪进行净化，从活化到上样、洗脱等一步到位，全自动过程排除人员操作带来的误差，且六通道同时进行萃取，能够实现高通量处理，最多一天能够处理180个样品；将净化后的样品直接置于EVA 80高通量全自动氮吹浓缩仪中，不仅避免转移的损失，又省时省力，真正为批量检测提供帮助。