以下是ELISA检测试剂盒常见问题问答整理分析出来以方便各位了解：

（1）问：小鼠乙酰胆碱Elisa检测试剂盒后期数据处理中空白的OD值有什么作用？

答：可以将标准品和样本的OD值同时减去空白的值进行计算，或者都不减，保持同一水平就行

。

（2）问：那我们算出来的ACH含量为什么出现负值？

答：说明个别样本的浓度很低,当浓度接近第6个点的时候,直线方程就有可能计算出负值。

（3）问：我两个空白孔一个啥都不加，一个加了后面的A液，B液还有终止液, 请问用哪一个

？

答:用加了A液，B液还有终止液的那个更加准确,因为样本都加过这些，可以排除相应的干扰。

（4）问：我想问一下，标准品浓度与标准品吸光度值之间是不是线性回归？检测出来的吸光度

值很低一般都存在哪些原因？大部分在0.08左右 ？（大鼠5羟色胺（5-HT）Elisa检测试剂盒

）

答：是线性回归。检测出来的值比较低 ，样本、稀释、操作等，原因很多，但只要在可操作范

围就行 。

（5）问：做出来的结果：标准品的吸光度呈线性回归，但是样品的吸光度都和本体吸光度值接

近，正常未予干预的大鼠血浆都基本没有5-HT 表达，这是什么原因？（大鼠5羟色胺（5-HT）

Elisa检测试剂盒）

答：样本、稀释、室控和机器操作等，原因都可能造成吸光度都和本体吸光度值接近，好像荧

光法里面有种试剂盒可以检测滴度。

（6）问：Elisa检测试剂盒的使用的方法是什么啊？

答：采用双抗夹心法 （目前暂行）

（7）问：一个孔需要多少量的血清？

答：一个孔上样量10-50微升。

（8）问:未处理的样本我需要邮寄多少的量？

答：每个孔需要100ul

（9）问：样本怎么保存？

答：当天要用的样本保存4℃，隔天样本-20℃（近期一个月左右要用的样本），长期保存样本

-70℃（一年或者更长时间多久都可以用），避免反复冻融。

（10）问：EP管是什么管？

答：离心管。

（11）问：收集血清的时候用什么管？

答：普通离心管即可。

（12）问：96t可以检测多少个样本？48t可以检测多少个样本？

答：96t标准的可以检测85个样本，其他有10个标准品孔，1个空白对照。96t单孔可以检测90

个样，7个标准品控 1个空白对照。48t标准的可以检测37个样本，其他有10个标准品孔，1个

空白对照。48t单孔可以检测40个样本，其他有7个标准品孔，1个空白对照。

（13）问：标准的检测85个样本的和单孔相比， 有什么好的地方吗？

答：标准的检测又叫复孔检测，标准的检验重复性测的结果好，所以大家都叫复孔是标准的检

测。

（14）问： 酶标板分次使用 剩下的建议怎么保持 ？

答：要是真的用不完或标本不多的情况下。做点处理后：板条和板架都是可拆卸的，可以再用

之，前拆下4条放置锡箔袋或其他无污染的袋子，放到冰箱 2-8度保存。

（15）问：酶标包被版是酶标板吗？

答：是的。

（16）问：请问植物茉莉酸和水杨酸检测的试剂盒，我们提取拟南芥的，一般取样量是多少？

答：1-3g。

（17）问：大鼠骨特异性碱性磷酸酶B（ALP-B）ELISA，大鼠血清抗酒石酸酸性磷酸酶5b

（TRACP-5B），我发现试剂盒里缺少标准品稀释液，没有它我的实验无法进行，盒子里面有特

殊稀释液是用来稀释样品的，但都没有标准品稀释液，我的样品已超出zui低检测限，所以需要

稀释标准品才行吗？

答：特殊稀释液是用来稀释标准品的，特殊稀释液一般情况不用当样本浓度特别高是先用特殊

稀释液稀释，标准品需要再稀释就也要用特殊稀释液。

（18）问：测出来的标准曲线值前面几盒都是0.98 才正常，后面怎么变成0.93了？

答：某个点偏离大可以去掉，保留5个点

（19）问：是不是空白对照就是什么都不加？

答：不加样本，不加样本稀释液，不加酶标试剂 其他都可以加。

（20）问：样本稀释液是配好的吗？

答：样本稀释液是配好的

（21）问：样本稀释液可以用来直接稀释血清吗？

答：可以，直接加40ul就可以。

（22）问：检测的时候需要在操净台中操作吗，还是在外面操作就可以了？

答：要求不是很严格，根据自己实验室的设备而定，都可以。

（23）问：人和肽素（copeptin）Elisa，洗涤液是浓缩的，是一次配好，还是现配现用？

答：浓缩的，现配现用。

（24）问：Elisa方法的不测人血小板第四因子里IgG抗体的滴度吗？

答：Elisa不测滴度的，荧光法可以测。

（25）问：酶标板不平，影响结果吗？

答：不影响结果的。

（26）问：小鼠TNF-α ELISA 我的标本是细胞，我想要测的结果：抑制TNF的产生 空白组、

模型组、药物组，药物组要成梯度抑制TNF的产生、请问Elisa方法的可以测吗？

答：细胞可以测 但要分组，得到相应的梯度值，计算结果。自己需要多查阅文献 。

（27）问：人睾酮（T）Elisa,人雌三醇（E3）Elisa，是用什么酶标记的？

答：辣根酶标记的 标本里不能加*

（28）问：我测植物水杨酸，标本是烟草叶片怎么处理的？那上清液检测SA时，还需要用甲醇

抽提吗？

答：称取烟叶500mg，研磨成粉末状，加入5ml浓度为0.01mol，PH值为7.4的PBS溶液，充分匀

浆，离心取上清液（3000-4000转，15分钟左右），分装保存，一般需要长期保存需放在-80度

，或者液氮中，备用，不用加甲醇。

（29）问：没有做出标准曲线来，你知道什么原因吗？

答：操作肯定有问题，做之前把标准品摇匀下。

（30）问：买同一个指标的几个盒子，用不用都做标准曲线？

答：如果同一个指标买了3盒，建议每盒都做个标曲。同一个盒子 ，即使分几次用，做一个标

曲也行了，因为数值不会偏差太大，差不多。