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ELISA检测试剂盒的研制方法

时间:2013-10-24      阅读:536

  ELISA检测试剂盒的研制方法扩增猪繁殖与呼吸综合征病毒核衣壳蛋白的大小409bp基因用RT-PCR(PRRSVN基因)的基因,克隆到表达载体pGEX-KG,pgex-kg-n的重组表达载体,转化BL21表达(DM3)通过SDS-PAGE和Westernblot分析表明,诱导表达,重组N蛋白,中高表达,与相对分子质量为41000的融合蛋白,并具有良好的免疫活性。

 

      ELISA检测试剂盒的研制方法扩大诱导培养,发酵,包涵体的提取,通过GST蛋白purtification盒亲和层析纯化目的蛋白,SDS-PAGE纯度为90%以上,可以满足诊断抗原的质量要求。纯化的PRRSV核衣壳N蛋白作为包被抗原,间接ELISA诊断方法建立检测PRRSV血清,ELISA试剂盒和组件。

 

       ELISA检测试剂盒的研制方法经过优化,*抗原包被浓度为2.5mg/L;血清的*稀释度为1∶100;对血清样品检测阈值为0.224;herdchekELISA试剂盒及美国IDEXX,符合率为92%,特异性为95%,敏感性为90%;猪细小病毒无交叉反应,猪伪狂犬病病毒,乙型脑炎病毒,猪圆环病毒,猪瘟病毒和其他常见的猪生殖疾病的阳性血清。

 

       内和批间变异系数分别为3.44%~6.34%和5.04%~7.64%。12个月的4℃条件具备稳定性无明显变化,试剂盒。对350例临床可疑血清阳性率为88.6%,该试剂盒。通过检测PRRSV血清抗体ELISA试剂盒的临床流行病学调查方法。

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