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碘记抗是一种有效的动物疫病诊断和检疫方

时间:2013-12-20      阅读:393

    用碘记抗是一种有用的记办法。125I衰变发作低能的γ和Χ射线,很简单被检测出来,而其60天的半衰期确保满足的有用使用期,且能很方便地处置放射废料。

 

zui常用的碘记办法是氯胺T,行将氧化剂氯胺T参加到抗和碘化物的溶液中,Na125I在氯胺T效果下I转化I2,游离I2可与抗分子中酪氨酸和一些组氨酸发作卤化反响,用还原剂和游离酪氨酸停止反响,经凝胶过滤将记的抗与碘化酪氨酸及还原剂分脱离。其操作过程如下:

 

1)在进行记之前,先选用截流分子量为20000-50000的凝胶,备1ml凝胶柱,然后分别用10倍积的1%BSA/PBS/0.02%叠氮钠和PBS洗刷柱,封住柱下口,备用。

 

2)参加10ug纯化单抗至富含25ul 2.5mol/L磷酸钠(PH7.5)的1.5ml指形管内。随后,参加500uCi Na125I混匀。

 

3)参加25ul新配的2mg/ml氯胺T。室温放置60秒。再参加50ul氯胺T停止液(含2.4mg/ml侧重亚硫酸钠,10mg/ml酪氨酸,10%甘油和0.1%环乙烷酰二甲苯的PBS)。

 

4将上述碘记物上样在凝胶柱外表,当心铺开柱下口,用1.5ml指形管搜集。当碘记物悉数进入柱,参加0.3ml0.03%叠氮钠的PBS,用另一指形管搜集0.3ml,然后再加0.3ml 0.03% NaN3 PBS,下口搜集0.3ml,重复进行,一起用同位素检测仪测定记与未记的单抗。记抗大约在第二至第四管出。无害化处置柱子和非单抗记有些。

 

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