分光光度计的基本原理补充

朗伯-比尔定律是比色分析的基本原理，这个定律是有色溶液对单色光的吸收程度与溶液及液层厚度间的定量关系。此定律是由朗伯定律和比尔定律归纳而得。

1.朗伯定律

一束单色光通过溶液后，由于溶液吸收了一部分光能，光的强度就要减弱：若溶液浓度不变，则溶液的厚度愈大（即光在溶液中所经过的途径愈长），光的强度减低也愈显着。

2.朗伯-比尔定律

如果同时考虑吸收层的厚度和溶液浓度对光吸收的影响，则必然将朗伯定律和比尔定律合并起来，吸光度与溶液的浓度和液层的厚度的乘积成正比，这就是朗伯-比尔定律。

分光光度计工作原理的限制性条件分光光度计的工作原理是是物质对光的选择吸收和琅伯-比尔定律。

论琅伯-比尔定律的限制性条件：

其一：通过溶液的光必须是平行的；

其二：通过溶液的光必须是单色光；

其三：待测溶液必须是纯净的、均匀的且浓度不宜过高，这是琅伯-比尔定律首要的三个前提条件。

在实际的分光光度计的制造和使用过程中这三个条件是不可能达到的：

其一：因为光是直线传播的，在分光光度计制造过程中，灯源发出的光是发散的，经过聚焦镜进行聚焦等直到经过溶液的整体过程中，光是不可能平行的。

其二：灯源发出的光是复合光，经过狭缝，再经过光栅分光等步骤，因为受到狭缝和光栅本身的限制，光栅分光不可能达到纯单色光。还有光度计的整体设计问题，光度计不可能没有其它的杂光存在。

其三：用户的溶液也不可能是纯净的，也会含有一些杂质，这些对光度的吸收都会存在影响。

除以上三个方面的影响外，在实际的光度计应用过程中还会存在其他因素的影响，例如：

1、经过比色皿的光是否垂直；