细胞传代的一般方法
时间：2015-10-16 阅读：1678
开始细胞传代前，仔细检查细胞传代所需的仪器和试剂是否齐全：一般主要有：细胞(单层细胞，镜检适合)、培养液(MEM-0.2%LH培养液或MEM培养液或199等适合细胞有要求的培养液)、灭活小牛血清、庆大霉素溶液（1万单位）、7.5％NaHC03溶液、0.25％胰蛋白酶、PBS洗液。
用具：小方瓶(100m1)、克氏瓶、胶塞、吸管(10ml、1m1）、细胞吹打管（20ml）(以上用具需经121℃至少15分钟高压灭菌)
C02孵箱、超净台、倒置显微镜、4℃、—20℃冰箱
操作步骤：镜检细胞，挑选生长状态良好，细胞界限清晰，具有立体感，形态好无污染、无异常及可疑病变细胞。配制细胞培养液：按以下配比配制MEM-0.2%LH培养液100ml内，加入灭活小牛血清10m1，庆大霉素溶液0.3m1，7.5%碳酸氢钠溶液3ml。（仅供一般参考）。消化细胞；先用PBS洗液冲洗细胞表面1-2次，每次10m1，弃去洗液，向细胞瓶内加入0.25％胰蛋白酶溶液，每瓶1m1，细胞瓶平放，使消化液*覆盖细胞表面。至细胞*脱落到胰酶中。每瓶加入10m1细胞培养液吹打分散细胞，按所需的传代比例分装于小方瓶(100m1)中，再加入10m1细胞培养液重复吹打一次后分装，然后补加至所需培养量。加塞，置于37±1℃孵箱培养。约2～4天成片。(由细胞接种浓度决定)；填写传代记录。