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面议3T3L1-GFP小鼠脂肪细胞-绿色标记操作步骤:
请收到细胞后,在倒置镜下(建议在4X物镜)观察整个细胞生长情况。
(一)如果细胞未长满,用75%酒精喷洒整个瓶消毒后放到超菌台内,严格无菌操作,打开细胞培养瓶,吸出培养液,换 10ml新鲜培养液后继续培养。
(二) (二)如果细胞已长满,即可进行传代培养。具体步骤如下:
1.弃去培养液,用PBS(不含钙,镁离子)洗1-2次。
2.加1ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培养瓶中,倒放于37℃培养箱1-3分钟预热,之后翻转培养瓶10-30秒后,在倒置显微镜下观察细胞消化情况,若细胞大部分变圆,迅速拿回操作台,轻敲几下培养瓶后加少量*培养基终止消化。
3.按6-8ml/瓶补加*培养基,轻轻打匀后吸出一半,分到新的培养瓶中。
如果没有特别说明,收到细胞后的*次传代一般是一传二。