WondaSil C18色谱柱操作说明

1.色谱柱信息

  WodnaSil C18液相色谱柱是在高纯度球状硅胶基质上键合十八烷基的反相分离模式色谱柱，适合用于弱极性至中等极性例如合成药物、中药、多肽、有机酸等的分离。WodnaSil C18液相色谱柱从硅胶基质的合成，到化学处理和装填后的性能检测，都是在本公司严格的产品控制下进行，因此不同批次的柱与柱之间具有优异的重现性;通过独有的装填技术填装的WodnaSil C18柱柱床密度均一稳定，从而确保色谱柱具有高柱效，硅胶粒径分布均匀，确保柱压极低。

  WodnaSil C18液相色谱柱具有优异的选择性，保留能力较强，端基封尾彻底，即使是酸性、碱性或者金属配位性化合物分析，也能保持良好的峰型。

  WodnaSil C18柱含碳量较低，可以使用100%纯水相或者纯的缓冲盐水溶液。

  为了能长期保持WodnaSil C18液相色谱柱的优越性能和正确的使用色谱柱，在使用色谱柱之前请仔细阅读本说明书。

2.使用前的检查与须知事项

●检查包装箱的外观有无异常。

●打开包装，检查色谱柱的填料名称、尺寸规格、连接型式是否相符。

●色谱柱中封存流动相为乙腈/水或者甲醇/水的混合物，具体比例请参考柱效报告。

3.色谱柱填料规格

4.色谱柱安装与操作

  色谱柱在运输过程中，两端用堵头密封。当将色谱柱接入色谱仪器系统时，首先请确保系统中的溶剂和液相柱中封存溶剂是互溶的。如果不能互溶，请采用一种能够与系统及色谱柱都能互溶的溶剂对系统进行充分过渡之后再将色谱柱连接到系统中，并注意流动相的方向要与柱.上标记的方向保持一致。我公司提供的常规液相色谱柱标准接头形式为1/16英寸Waters接头螺丝型(如下左图)。

色谱柱连接好之后，请确认无漏液现象之后再进行后续操作。

  新的WodnaSil C18柱是保存在乙腈/水或者甲醇/水的混合溶液中，在储存和运输过程中，硅胶填料可能会干涸，推荐用纯的甲醇或乙腈冲洗10~20倍柱体积对色谱柱进行活化，流速从0. 1mL/min缓慢上升到最佳流速。(如果在活化过程中即发现压力和基线不正常时，请及时联系我公司工程师及时处理。)然后再用不含缓冲盐的流动相进行平衡20倍柱体积，再用

流动相平衡，待压力和基线稳定之后，再进样分析。

5.样品与流动相

  为避免色谱柱堵塞，所有样品及溶剂，包括缓冲溶液在内，在使用前必须用0.45μm或者0.22uμm的滤膜过滤。

6.色谱柱的保养

●pH WodnaSil C18色谱柱可在pH2~7.5范围内使用，为保持色谱柱良好的寿命，请避免较强的酸或碱性样品或者流动相进入色谱柱。

●耐压 常规色谱柱耐受压力为20MPa，但是正常的压力建议控制在耐受压力的2/3以下。长时间在高压下运行会对色谱柱造成难以修复的损害，因此系统压力升高之后，建议尽快排查系统，如果是色谱柱压力升高，请及时采用适当溶剂冲洗色谱柱。

●温度 最高操作温度为60℃，长时间在高温下操作会显著降低色谱柱寿命。

●冲洗1. 新柱平衡:新柱是保存在高比例的有机溶剂中，建议先采用色谱柱保存流动相平衡色谱柱一段时间，观察基线和压力是否正常，然后再通入流动相。

  如果流动相中不使用缓冲盐或离子对试剂，直接用流动相平衡即可;如果流动相使用缓冲盐，先要用高比例的水相充分过渡20倍柱体积，然后进行流动相平衡。

2.使用完毕后的清洗、保存及再使用时流动相的过渡:

①使用完毕后，先用高比例的水相进行冲洗约20倍柱体积。

②如果流动相中不使用缓冲盐或离子对试剂，上述①完毕后，用100%的有机溶剂冲洗约20倍柱体积，然后此条件下进行保存，再使用时直接冲流动相即可。

③如果流动相中使用缓冲盐或离子对试剂，上述①完毕后，用100%的有机溶剂冲洗约20倍柱体积，然后此条件下进行保存，再使用时请务必用高比例的水相充分过渡20倍柱体积，再通入流动相。

●储存色谱 柱长期不用，建议日常冲洗方法完成之后，再用纯乙腈或者甲醇冲洗20倍柱体积，然后保存在该流动相条件下，之后卸掉色谱柱，两端用堵头密封，并放在温度变化小的场所。